Análisis de punto de ruptura de translocaciones cromosómicas aparentemente equilibradas de Novo

El retraso psicomotor se observa en aproximadamente un 3% de la población general y tiene diversas causas: ambientales, genéticas (gen o cromosoma) o desconocidas. Se han identificado anomalías cromosómicas en el 15% de los retrasos psicomotores sindrómicos (es decir, asociado con otro síntoma). Las translocaciones cromosómicas equilibradas se observan en uno de cada 1000 individuos y sólo el 6% de los pacientes con translocaciones aparentemente equilibradas de novo tienen un fenotipo anormal (Warburton, 1991). La revisión de la literatura, sobre el análisis de microarrays de translocaciones aparentemente equilibradas de novo en pacientes con retraso psicomotor, revela:* en el 40% de los casos: una anomalía no identificada en el cariotipo, ya sea en los puntos de ruptura de la translocación o en una ubicación diferente en el genoma*, en el 60% de los casos: no se encuentran anomalías con una resolución de hasta 25kb (Schluth-Bolard et al., 2009). La técnica generalmente utilizada para clonar un punto de ruptura e identificar un gen alterado es un "paseo" por el cromosoma. Esta técnica utiliza sondas fluorescentes, como BAC o PAC, ubicadas en los cromosomas derivados a ambos lados de los puntos de ruptura. Esta técnica requiere mucha mano de obra, mucho tiempo y es costosa porque uno debe sondear a lo largo de los cromosomas derivados, cada vez más cerca del punto de ruptura, para encontrar la sonda que se superpone al punto de ruptura. Los investigadores proponen una técnica original, innovadora y rápida para mapear los puntos de ruptura de la translocación cromosómica en pacientes con retraso psicomotor y sin anomalías en el análisis de microarrays. El objetivo principal es desarrollar una técnica para identificar nuevos genes mediante la clonación y el mapeo de los puntos de ruptura de la translocación cromosómica. Estos genes serían entonces candidatos para explicar el fenotipo del paciente. El estudio cubre un período de 24 meses e incluye 10 pacientes. Se evaluará la viabilidad de la técnica, así como su aplicación al diagnóstico rutinario de laboratorio. El estudio fue aprobado por nuestro Comité de Bioética local y respeta la ley francesa de bioética. Metodología: Los pacientes serán seleccionados durante las reuniones del personal, incluidos médicos y biólogos. Se realizará un análisis inicial de micromatrices para identificar una ganancia o pérdida de material genético. Las muestras para las que no se identifica bien ninguna ganancia o pérdida se someten a citometría de flujo para aislar los cromosomas derivados. Cada cromosoma derivado se hibridará en una nueva micromatriz, revelando así el punto de ruptura. Los puntos de ruptura se confirmarán mediante la técnica FISH y se aplicarán técnicas de biología molecular para clonar y secuenciar los puntos de ruptura. Las bases de datos se pueden usar para verificar los genes ubicados en o alrededor de los puntos de ruptura. Información requerida: Datos administrativos (3 primeras letras del apellido y 2 primeras letras del primer nombre, fecha de nacimiento, identificación de los padres, consentimiento informado). Datos clínicos y biológicos (fenotipo, cariotipo, otros estudios genéticos). Resultados esperados: desarrollo de una técnica rápida y menos costosa para clonar puntos de ruptura de translocación, identificación de genes potencialmente involucrados en el retraso mental y anomalías del desarrollo embrionario, evaluación de la distribución de varias causas de retraso mental sindrómico (translocación desequilibrada en microarray, reordenamiento adicional en microarray , interrupción del gen o causa no identificada).