Análise de ponto de interrupção de translocações cromossômicas aparentemente balanceadas de Novo

O atraso psicomotor é observado em aproximadamente 3% da população geral e tem várias causas: ambientais, genéticas (gene ou cromossomo) ou desconhecidas. Anormalidades cromossômicas foram identificadas em 15% dos atrasos psicomotores sindrômicos (ou seja, associada a outro sintoma). Translocações cromossômicas balanceadas são observadas em um em cada 1.000 indivíduos e apenas 6% dos pacientes com translocações aparentemente balanceadas de novo têm um fenótipo anormal (Warburton, 1991). A revisão da literatura, relativa à análise de microarray de translocações aparentemente balanceadas de novo em pacientes com atraso psicomotor, revela:* em 40% dos casos: uma anormalidade não identificada no cariótipo, seja nos pontos de interrupção da translocação ou em outro local no genoma,* em 60% dos casos: nenhuma anormalidade é encontrada com uma resolução de até 25kb (Schluth-Bolard et al., 2009). A técnica geralmente usada para clonar um ponto de interrupção e identificar um gene interrompido é uma "caminhada" no cromossomo. Essa técnica usa sondas fluorescentes, como BACs ou PACs, localizadas nos cromossomos derivados em ambos os lados dos pontos de interrupção. Essa técnica é trabalhosa, demorada e cara porque é preciso sondar os cromossomos derivados, cada vez mais perto do ponto de interrupção, a fim de encontrar a sonda que se sobrepõe ao ponto de interrupção. Os pesquisadores propõem uma técnica original, inovadora e rápida para mapear os pontos de interrupção da translocação cromossômica em pacientes com atraso psicomotor e sem anormalidades na análise do microarray. O objetivo principal é desenvolver uma técnica para identificar novos genes por clonagem e mapeamento de pontos de quebra de translocação cromossômica. Esses genes seriam então candidatos a explicar o fenótipo do paciente. O estudo abrange um período de 24 meses e inclui 10 pacientes. A viabilidade da técnica, bem como sua aplicação no diagnóstico laboratorial de rotina, será avaliada. O estudo foi aprovado pelo nosso Comitê de Bioética local e respeita a lei francesa de bioética. Metodologia: Os pacientes serão selecionados durante reuniões de equipe, incluindo clínicos e biólogos. Uma análise inicial de microarray será realizada para identificar um ganho ou perda de material genético. As amostras para as quais nenhum ganho ou perda é bem identificado passam por citometria de fluxo para isolar os cromossomos derivados. Cada cromossomo derivado será então hibridizado com um novo microarray, revelando assim o ponto de interrupção. Os breakpoints serão confirmados pela técnica de FISH e técnicas de biologia molecular serão aplicadas para clonar e sequenciar os breakpoints. Os bancos de dados serão usados ​​para verificar os genes localizados dentro ou ao redor dos pontos de interrupção. Informação necessária: Dados administrativos (3 primeiras letras do apelido e 2 primeiras letras do nome próprio, data de nascimento, identificação dos pais, consentimento informado). Dados clínicos e biológicos (fenótipo, cariótipo, outros estudos genéticos). Resultados esperados: Desenvolvimento de técnica rápida e menos dispendiosa para clonar pontos de interrupção de translocação, Identificação de genes potencialmente envolvidos em atraso mental e anomalias do desenvolvimento embrionário, Avaliação da distribuição de várias causas de atraso mental sindrômico (translocação desequilibrada em microarray, rearranjo adicional em microarray , disrupção genética ou causa não identificada).