Breakpoint Analysis of De Novo Traslocazioni Cromosomiche Apparentemente Bilanciate

Il ritardo psicomotorio si osserva in circa il 3% della popolazione generale e ha varie cause: ambientali, genetiche (gene o cromosoma) o sconosciute. Anomalie cromosomiche sono state identificate nel 15% del ritardo psicomotorio sindromico (es. associato ad un altro sintomo). Traslocazioni cromosomiche bilanciate sono osservate in un individuo su 1000 e solo il 6% dei pazienti con traslocazioni apparentemente bilanciate de novo ha un fenotipo anormale (Warburton, 1991). La revisione della letteratura, riguardante l'analisi di microarray di traslocazioni apparentemente bilanciate de novo in pazienti con ritardo psicomotorio, rivela:* nel 40% dei casi: un'anomalia non identificata sul cariotipo, né ai breakpoint della traslocazione né in una diversa posizione sul genoma,* nel 60% dei casi: non si riscontrano anomalie con una risoluzione fino a 25kb (Schluth-Bolard et al., 2009). La tecnica generalmente utilizzata per clonare un breakpoint e identificare un gene interrotto è una "passeggiata" sul cromosoma. Questa tecnica utilizza sonde fluorescenti, come BAC o PAC, situate sui cromosomi derivati ​​su entrambi i lati dei breakpoint. Questa tecnica è laboriosa, dispendiosa in termini di tempo e costosa perché è necessario sondare lungo i cromosomi derivati, sempre più vicini al punto di interruzione, per trovare la sonda che si sovrappone al punto di interruzione. I ricercatori propongono una tecnica originale, innovativa e rapida per mappare i punti di interruzione della traslocazione cromosomica in pazienti con ritardo psicomotorio e nessuna anomalia all'analisi dei microarray. L'obiettivo principale è quello di sviluppare una tecnica per identificare nuovi geni clonando e mappando i breakpoint della traslocazione cromosomica. Questi geni sarebbero poi candidati a spiegare il fenotipo del paziente. Lo studio copre un periodo di 24 mesi e comprende 10 pazienti. Sarà valutata la fattibilità della tecnica, così come la sua applicazione alla diagnosi di laboratorio di routine. Lo studio è stato approvato dal nostro comitato di bioetica locale e rispetta la legge francese sulla bioetica.Metodologia: i pazienti saranno selezionati durante le riunioni del personale, inclusi medici e biologi. Un'analisi iniziale di microarray può essere eseguita per identificare un guadagno o una perdita di materiale genetico. I campioni per i quali non viene identificato bene alcun guadagno o perdita vengono quindi sottoposti a citometria a flusso per isolare i cromosomi derivati. Ogni cromosoma derivato può quindi essere ibridato con un nuovo microarray, rivelando così il punto di rottura. I breakpoint saranno confermati mediante tecnica FISH e tecniche di biologia molecolare saranno applicate per clonare e sequenziare i breakpoint. I database possono essere utilizzati per verificare la presenza di geni situati all'interno o intorno ai punti di interruzione. Informazioni richieste: dati amministrativi (3 prime lettere del cognome e 2 prime lettere del nome, data di nascita, identificazione dei genitori, consenso informato). Dati clinici e biologici (fenotipo, cariotipo, altri studi genetici). Risultati attesi: Sviluppo di una tecnica rapida e meno costosa per clonare breakpoint di traslocazione, Identificazione di geni potenzialmente coinvolti nel ritardo mentale e nelle anomalie dello sviluppo embrionale, Valutazione della distribuzione delle varie cause di ritardo mentale sindromico (traslocazione sbilanciata su microarray, riarrangiamento aggiuntivo su microarray , rottura genica o causa non identificata).