N2-(1-carboxietil)-2'desoxiguanosina (CEdG), un biomarcador potencial para la diabetes

El objetivo principal es replicar y validar el ensayo CEdG para su uso en sujetos humanos. Se ha desarrollado un ensayo totalmente automatizado para CEdG urinario. los investigadores validarán las observaciones realizadas en modelos animales diabéticos en sujetos humanos con y sin diabetes mellitus tipo 2 (T2DM). Específicamente, los investigadores investigarán y establecerán los coeficientes de variabilidad interensayo e intraensayo en sujetos humanos.

El objetivo secundario es determinar la correlación entre los niveles de CEdG y la hemoglobina A1c (HbA1c) en sujetos humanos con DM2 y la respuesta al tratamiento diabético y definir la relación de CEdG con las complicaciones diabéticas. Los investigadores examinarán la relación de CEdG con el control glucémico, basado en HbA1c, que es el estándar de oro actual, tanto en pacientes con diabetes tipo 1 como tipo 2. Los investigadores también comparan los cambios en los niveles de CEdG y Hb1Ac en respuesta al tratamiento diabético en pacientes diabéticos. También se investigará la relación de CEdG con las complicaciones diabéticas en pacientes diabéticos.

Consideraciones estadísticas para el objetivo principal:

Tamaño de la muestra: debido a que hay muchas más variables en sujetos humanos, los investigadores calcularon el tamaño de la muestra basándose en una suposición mucho más conservadora que la que observaron en modelos animales diabéticos. Los investigadores están planeando un estudio de una variable de respuesta continua de controles independientes y sujetos experimentales con 1 control por sujeto experimental. Según los datos de los animales, los investigadores esperan que los resultados dentro de cada grupo de sujetos se distribuyan normalmente con una desviación estándar de 0,3. Si la verdadera diferencia de medias entre los grupos diabéticos y no diabéticos es 0,5, los investigadores deberán estudiar 9 sujetos diabéticos y 9 no diabéticos para poder rechazar la hipótesis nula de que las medias poblacionales de los grupos experimental y de control son iguales con probabilidad (potencia) 0.9. La probabilidad de error Tipo I asociada con esta prueba de esta hipótesis nula es 0.05. Para tener en cuenta una posible tasa de deserción del 30 %, los investigadores incorporarán al estudio 12 sujetos diabéticos y 12 no diabéticos.

Análisis estadístico: El efecto del estado diabético en los niveles urinarios de CEdG se comparará mediante una prueba t de Student. Las diferencias en las variables continuas entre los grupos de sujetos se probarán con ANOVA unidireccional o con la prueba t de Student cuando corresponda. Las diferencias en proporciones se evaluarán mediante una prueba de chi-cuadrado. Las variables continuas, que no superen la prueba de Normalidad, serán transformadas logarítmicamente antes del análisis. Para examinar la influencia de las variables de confusión, se utilizará un análisis de regresión por pasos. Un valor de p inferior a 0,05 se considerará estadísticamente significativo.

De acuerdo con las directrices del NIH para la validación de métodos analíticos para biomarcadores utilizados en el desarrollo de fármacos, para moléculas pequeñas, ensayos bioanalíticos en los que la serie analítica se acepta como válida cuando al menos el 67 % (4/6) de los controles de calidad se encuentran dentro del 15 % de su valor nominal. La consistencia de 6 ejecuciones repetidas se evaluará mediante la prueba de Grubbs para la repetibilidad dentro de cada sujeto. La consistencia general de las medidas de CEdG se puede cuantificar por la proporción de sujetos con 1+ valores atípicos identificados entre las 6 ejecuciones repetidas. Para obtener una estimación inicial de la consistencia del ensayo CEdG, los investigadores tomarán el número de esas seis mediciones que caen dentro del 15 % de la media como nuestra medida de resultado. La validación definitiva de un biomarcador requerirá enfoques de ensayo cuantitativos o cuantitativos relativos definitivos.

Consideraciones estadísticas para el objetivo secundario:

Los investigadores realizarán una regresión de los valores de y-var (HbA1c) de los participantes del estudio frente a x-var (CEdG). Los datos previos indican que la desviación estándar de x-var es 0,15 y la desviación estándar de los errores de regresión será 0,15. Si la verdadera pendiente de la recta obtenida al hacer una regresión de y-var contra x-var es 0,3, los investigadores deberán estudiar 89 sujetos para poder rechazar la hipótesis nula de que esta pendiente es igual a cero con una probabilidad (potencia) de 0,8. La probabilidad de error Tipo I asociada con esta prueba de esta hipótesis nula es 0.05. Por lo tanto, se reclutarán 100 sujetos para el estudio para dar cuenta de la posible deserción de sujetos.

Las características clínicas y demográficas de los pacientes se tabularán utilizando estadísticas de media, desviación estándar, mediana, rango, número y porcentaje cuando corresponda. Los datos de CEdG se analizarán como una variable continua o transformada para el nivel de expresión medido. La correlación univariada entre la expresión de CEdG y cada medida clínica cuantitativa se evaluará mediante la correlación de Pearson y su intervalo de confianza del 95%. Se explorará la tendencia temporal de los datos longitudinales y su posible interacción con otros factores de riesgo mediante diagramas de caja, curvas ajustadas, modelos lineales generalizados y ecuaciones de estimación generalizadas, según corresponda. Las correlaciones estimadas entre los datos del CEdG y los criterios de valoración clínicos, y sus posibles tendencias temporales durante el período de 12 meses, proporcionarán información valiosa para elegir el criterio principal de valoración y el tamaño de la muestra en un futuro estudio de correlación a mayor escala.