N2-(1-carboxyethyl)-2'Deoxyguanosine (CEdG) een potentiële biomarker voor diabetes

Primaire doelstelling is het repliceren en valideren van de CEdG-assay voor gebruik bij menselijke proefpersonen. Er is een volledig geautomatiseerde assay voor CEdG in de urine ontwikkeld. de onderzoekers zullen de observaties valideren die zijn gedaan in diabetische diermodellen bij mensen met en zonder diabetes mellitus type 2 (T2DM). Concreet zullen de onderzoekers de inter- en intra-assay coëfficiënten van variabiliteit bij menselijke proefpersonen onderzoeken en vaststellen.

Secundaire doelstelling is het bepalen van de correlatie tussen CEdG-waarden en hemoglobulinen A1c (HbA1c) bij mensen met T2DM en de respons op diabetesbehandeling en het definiëren van de relatie van CEdG met diabetische complicaties. De onderzoekers gaan de relatie van CEdG met glykemische controle onderzoeken, op basis van HbA1c, de huidige gouden standaard, bij zowel patiënten met type 1- als type 2-diabetes. De onderzoekers vergelijken ook de veranderingen in CEdG- en Hb1Ac-spiegels als reactie op diabetesbehandeling bij diabetespatiënten. De relatie van CEdG met diabetische complicaties zal ook worden onderzocht bij diabetespatiënten.

Statistische overwegingen voor het hoofddoel:

Steekproefomvang: Omdat er veel meer variabelen zijn bij menselijke proefpersonen, berekenden de onderzoekers de steekproefomvang op basis van een veel conservatievere aanname dan wat de onderzoekers observeerden bij diabetische diermodellen. De onderzoekers plannen een studie van een continue responsvariabele van onafhankelijke controle- en proefpersonen met 1 controle per proefpersoon. Op basis van de diergegevens verwachten de onderzoekers dat de resultaten binnen elke proefgroep normaal verdeeld zijn met een standaarddeviatie van 0,3. Als het werkelijke verschil in het gemiddelde tussen de diabetische en niet-diabetische groepen 0,5 is, zullen de onderzoekers 9 diabetische en 9 niet-diabetische proefpersonen moeten bestuderen om de nulhypothese te kunnen verwerpen dat de populatiegemiddelden van de experimentele en controlegroepen gelijk zijn met kans (macht) 0,9. De Type I-foutkans geassocieerd met deze test van deze nulhypothese is 0,05. Om rekening te houden met een mogelijk uitvalpercentage van 30%, zullen de onderzoekers 12 diabetische en 12 niet-diabetische proefpersonen aan het onderzoek toevoegen.

Statistische analyse: het effect van de diabetesstatus op de CEdG-waarden in de urine zal worden vergeleken met behulp van een Student's t-test. Verschillen in continue variabelen tussen de groepen proefpersonen zullen worden getest met ofwel eenrichtings-ANOVA of Student's t-test, indien van toepassing. Verschillen in verhoudingen worden beoordeeld met een chikwadraattoets. De continue variabelen die niet slagen voor de normaliteitstest, worden vóór analyse logaritmisch getransformeerd. Om de invloed van verstorende variabelen te onderzoeken, zal een stapsgewijze regressieanalyse worden gebruikt. Een p-waarde van minder dan 0,05 wordt als statistisch significant beschouwd.

Volgens de NIH-richtlijnen voor validatie van analytische methoden voor biomarkers die worden gebruikt bij de ontwikkeling van geneesmiddelen, voor kleine moleculen, bioanalytische assays waarbij de analytische run als geldig wordt geaccepteerd wanneer ten minste 67% (4/6) van de kwaliteitscontroles binnen 15% valt van hun nominale waarde. De consistentie van 6 herhaalde runs wordt geëvalueerd door de Grubbs-test op herhaalbaarheid binnen elk onderwerp. De algehele consistentie van CEdG-metingen kan worden gekwantificeerd door het aantal proefpersonen met 1+ geïdentificeerde uitschieters onder de 6 herhaalde runs. Om een ​​basisschatting van de consistentie van de CEdG-assay te verkrijgen, nemen de onderzoekers het aantal van die zes metingen dat binnen 15% van het gemiddelde valt als onze uitkomstmaat. Definitieve validatie van een biomarker vereist definitieve kwantitatieve of relatieve kwantitatieve testbenaderingen.

Statistische overwegingen voor het nevendoel:

De onderzoekers zullen de waarden van y-var (HbA1c) van de deelnemers aan de studie terugbrengen tegen x-var (CEdG). Eerdere gegevens geven aan dat de standaarddeviatie van x-var 0,15 is en dat de standaarddeviatie van de regressiefouten 0,15 zal zijn. Als de werkelijke helling van de lijn die wordt verkregen door y-var te regresseren tegen x-var 0,3 is, zullen de onderzoekers 89 proefpersonen moeten bestuderen om de nulhypothese te kunnen verwerpen dat deze helling gelijk is aan nul met een waarschijnlijkheid (macht) van 0,8. De Type I-foutkans geassocieerd met deze test van deze nulhypothese is 0,05. Daarom zullen 100 proefpersonen worden aangeworven voor het onderzoek om rekening te houden met mogelijke uitval van proefpersonen.

Demografische en klinische kenmerken van de patiënt worden getabelleerd met behulp van statistieken van gemiddelde, standaarddeviatie, mediaan, bereik, aantal en percentage, indien van toepassing. CEdG-gegevens zullen worden geanalyseerd als een continue of getransformeerde variabele voor het gemeten expressieniveau. De univariate correlatie tussen de CEdG-expressie en elke kwantitatieve klinische meting zal worden geëvalueerd met behulp van Pearson-correlatie en het 95%-betrouwbaarheidsinterval. De tijdstrend in longitudinale gegevens en de mogelijke interactie met andere risicofactoren zal worden onderzocht met behulp van boxplots, aangepaste curven, gegeneraliseerde lineaire modellen en gegeneraliseerde schattingsvergelijkingen, indien van toepassing. Geschatte correlaties tussen CEdG-gegevens en klinische eindpunten, en de mogelijke tijdstrends gedurende de periode van 12 maanden, zullen waardevolle informatie opleveren voor het kiezen van het primaire eindpunt en de steekproefomvang in een toekomstige correlatiestudie op grotere schaal.