N2-(1-carboxietil)-2'Desoxiguanosina (CEdG) um potencial biomarcador para diabetes

O objetivo principal é replicar e validar o ensaio CEdG para ser usado em seres humanos. Foi desenvolvido um ensaio totalmente automatizado para CEdG urinário. os investigadores validarão as observações feitas em modelos animais diabéticos em seres humanos com e sem diabetes mellitus tipo 2 (T2DM). Especificamente, os investigadores investigarão e estabelecerão os coeficientes de variabilidade inter e intra-ensaio em seres humanos.

O objetivo secundário é determinar a correlação entre os níveis de CEdG e hemoglobulina A1c (HbA1c) em seres humanos com DM2 e a resposta ao tratamento diabético e definir a relação de CEdG com complicações diabéticas. Os investigadores examinarão a relação do CEdG com o controle glicêmico, com base na HbA1c, que é o padrão ouro atual, em pacientes com diabetes tipo 1 e tipo 2. Os investigadores também compararam as mudanças nos níveis de CEdG e Hb1Ac em resposta ao tratamento diabético em pacientes diabéticos. A relação do CEdG com complicações diabéticas também será investigada em pacientes diabéticos.

Considerações estatísticas para o objetivo principal:

Tamanho da amostra: Como há muito mais variáveis ​​em seres humanos, os investigadores calcularam o tamanho da amostra com base em uma suposição muito mais conservadora do que os pesquisadores observaram em modelos de animais diabéticos. Os investigadores estão planejando um estudo de uma variável de resposta contínua de controle independente e sujeitos experimentais com 1 controle por sujeito experimental. Com base nos dados dos animais, os investigadores esperam que os resultados dentro de cada grupo de sujeitos sejam normalmente distribuídos com um desvio padrão de 0,3. Se a verdadeira diferença na média entre os grupos diabéticos e não diabéticos for 0,5, os investigadores precisarão estudar 9 diabéticos e 9 não diabéticos para poder rejeitar a hipótese nula de que as médias populacionais dos grupos experimental e controle são iguais com probabilidade (potência) 0,9. A probabilidade de erro Tipo I associada a este teste desta hipótese nula é de 0,05. Para contabilizar uma possível taxa de atrito de 30%, os investigadores adicionarão 12 indivíduos diabéticos e 12 não diabéticos ao estudo.

Análise Estatística: O efeito do estado diabético nos níveis urinários de CEdG será comparado usando o teste t de Student. Diferenças em variáveis ​​contínuas entre os grupos de sujeitos serão testadas com ANOVA de uma via ou teste t de Student, quando apropriado. Diferenças nas proporções serão avaliadas pelo teste qui-quadrado. As variáveis ​​contínuas, que falham no teste de Normalidade, serão transformadas logaritmicamente antes da análise. Para examinar a influência das variáveis ​​de confusão, uma análise de regressão passo a passo será usada. Um valor de p inferior a 0,05 será considerado estatisticamente significativo.

De acordo com as diretrizes do NIH para validação de métodos analíticos para biomarcadores usados ​​no desenvolvimento de medicamentos, para moléculas pequenas, ensaios bioanalíticos em que a execução analítica é aceita como válida quando pelo menos 67% (4/6) dos controles de qualidade estão dentro de 15% de seu valor nominal. A consistência de 6 execuções repetidas será avaliada pelo teste de Grubbs para repetibilidade dentro de cada sujeito. A consistência geral das medidas de CEdG pode ser quantificada pela proporção de indivíduos com 1+ outliers identificados entre as 6 execuções repetidas. Para obter uma estimativa de linha de base da consistência do ensaio CEdG, os investigadores tomarão o número dessas seis medições que caem dentro de 15% da média como nossa medida de resultado. A validação definitiva de um biomarcador exigirá abordagens de ensaio quantitativas quantitativas ou relativas definitivas.

Considerações estatísticas para o objetivo secundário:

Os investigadores regredirão os valores dos participantes do estudo de y-var (HbA1c) contra x-var (CEdG). Dados anteriores indicam que o desvio padrão de x-var é 0,15 e o desvio padrão dos erros de regressão será 0,15. Se a verdadeira inclinação da linha obtida pela regressão de y-var contra x-var for 0,3, os investigadores precisarão estudar 89 indivíduos para poder rejeitar a hipótese nula de que essa inclinação é igual a zero com probabilidade (potência) 0,8. A probabilidade de erro Tipo I associada a este teste desta hipótese nula é de 0,05. Portanto, 100 indivíduos serão recrutados para o estudo para contabilizar o potencial atrito de indivíduos.

As características demográficas e clínicas do paciente serão tabuladas usando estatísticas de média, desvio padrão, mediana, variação, número e porcentagem, quando apropriado. Os dados de CEdG serão analisados ​​como uma variável contínua ou transformada para o nível de expressão medido. A correlação univariada entre a expressão de CEdG e cada medida clínica quantitativa será avaliada pela correlação de Pearson e seu intervalo de confiança de 95%. A tendência temporal em dados longitudinais e sua possível interação com outros fatores de risco serão exploradas usando boxplots, curvas ajustadas, modelos lineares generalizados e equações de estimativa generalizada conforme apropriado. As correlações estimadas entre dados de CEdG e endpoints clínicos e suas possíveis tendências de tempo durante o período de 12 meses fornecerão informações valiosas para a escolha do endpoint primário e tamanho da amostra em um futuro estudo de correlação em maior escala.