N2-(1-carbossietil)-2'deossiguanosina (CEdG) un potenziale biomarcatore per il diabete

L'obiettivo primario è replicare e convalidare il dosaggio CEdG da utilizzare nei soggetti umani. È stato sviluppato un test completamente automatizzato per CEdG urinario. i ricercatori convalideranno le osservazioni fatte in modelli animali diabetici in soggetti umani con e senza diabete mellito di tipo 2 (T2DM). In particolare, i ricercatori indagheranno e stabiliranno i coefficienti di variabilità inter e intra-saggio nei soggetti umani.

L'obiettivo secondario è determinare la correlazione tra i livelli di CEdG e l'emoglobulina A1c (HbA1c) in soggetti umani con T2DM e la risposta al trattamento diabetico e definire la relazione di CEdG con le complicanze diabetiche. I ricercatori esamineranno la relazione di CEdG con il controllo glicemico, basato su HbA1c, che è l'attuale gold standard, in entrambi i pazienti con diabete di tipo 1 e di tipo 2. I ricercatori confrontano anche i cambiamenti nei livelli di CEdG e Hb1Ac in risposta al trattamento diabetico nei pazienti diabetici. La relazione di CEdG con complicanze diabetiche sarà anche studiata nei pazienti diabetici.

Considerazioni statistiche per l'obiettivo primario:

Dimensione del campione: poiché ci sono molte più variabili nei soggetti umani, i ricercatori hanno calcolato la dimensione del campione sulla base di un presupposto molto più conservativo rispetto a quello che i ricercatori hanno osservato dai modelli animali diabetici. Gli investigatori stanno pianificando uno studio di una variabile di risposta continua da controllo indipendente e soggetti sperimentali con 1 controllo per soggetto sperimentale. Sulla base dei dati sugli animali, i ricercatori si aspettano che i risultati all'interno di ciascun gruppo di soggetti siano distribuiti normalmente con una deviazione standard di 0,3. Se la vera differenza nella media tra i gruppi diabetici e non diabetici è 0,5, i ricercatori dovranno studiare 9 soggetti diabetici e 9 soggetti non diabetici per poter rifiutare l'ipotesi nulla che la popolazione media dei gruppi sperimentali e di controllo sono uguali con probabilità (potenza) 0,9. La probabilità di errore di tipo I associata a questo test di questa ipotesi nulla è 0,05. Per tenere conto di un possibile tasso di abbandono del 30%, i ricercatori aggiungeranno allo studio 12 soggetti diabetici e 12 non diabetici.

Analisi statistica: l'effetto dello stato diabetico sui livelli urinari di CEdG sarà confrontato utilizzando il t-test di Student. Le differenze nelle variabili continue tra i gruppi di soggetti saranno testate con ANOVA unidirezionale o test t di Student quando appropriato. Le differenze nelle proporzioni saranno valutate mediante un test chi-quadrato. Le variabili continue, che falliscono il test di normalità, saranno trasformate logaritmicamente prima dell'analisi. Per esaminare l'influenza delle variabili confondenti, verrà utilizzata un'analisi di regressione graduale. Un valore p inferiore a 0,05 sarà considerato statisticamente significativo.

Secondo le linee guida NIH per la convalida di metodi analitici per biomarcatori utilizzati nello sviluppo di farmaci, per piccole molecole, saggi bioanalitici in cui il ciclo analitico è accettato come valido quando almeno il 67% (4/6) dei controlli di qualità rientra nel 15% di il loro valore nominale. La consistenza di 6 corse ripetute sarà valutata dal test di Grubbs per la ripetibilità all'interno di ciascun soggetto. La coerenza complessiva delle misure CEdG può essere quantificata dalla proporzione di soggetti con 1+ valori anomali identificati tra le 6 esecuzioni ripetute. Per ottenere una stima di base della coerenza del dosaggio CEdG, i ricercatori prenderanno il numero di quelle sei misurazioni che rientrano nel 15% della media come misura del risultato. La convalida definitiva di un biomarcatore richiederà approcci di analisi quantitativa definitiva o quantitativa relativa.

Considerazioni statistiche per l'obiettivo secondario:

Gli investigatori regrediranno i valori dei partecipanti allo studio di y-var (HbA1c) rispetto a x-var (CEdG). I dati precedenti indicano che la deviazione standard di x-var è 0,15 e la deviazione standard degli errori di regressione sarà 0,15. Se la vera pendenza della linea ottenuta regredendo y-var rispetto a x-var è 0,3, i ricercatori dovranno studiare 89 soggetti per poter rifiutare l'ipotesi nulla che questa pendenza sia uguale a zero con probabilità (potenza) 0,8. La probabilità di errore di tipo I associata a questo test di questa ipotesi nulla è 0,05. Pertanto, 100 soggetti saranno reclutati per lo studio per tenere conto del potenziale attrito dei soggetti.

Le caratteristiche demografiche e cliniche del paziente saranno tabulate utilizzando statistiche di media, deviazione standard, mediana, intervallo, numero e percentuale quando appropriato. I dati CEdG saranno analizzati come variabile continua o trasformata per il livello di espressione misurato. La correlazione univariata tra l'espressione CEdG e ciascuna misura clinica quantitativa sarà valutata utilizzando la correlazione di Pearson e il suo intervallo di confidenza al 95%. L'andamento temporale dei dati longitudinali e la sua possibile interazione con altri fattori di rischio saranno esplorati utilizzando boxplot, curve adattate, modelli lineari generalizzati ed equazioni di stima generalizzate, a seconda dei casi. Le correlazioni stimate tra i dati CEdG e gli endpoint clinici e le sue possibili tendenze temporali durante il periodo di 12 mesi forniranno informazioni preziose per la scelta dell'endpoint primario e della dimensione del campione in un futuro studio di correlazione su scala più ampia.