N2-(1-karboksyetylo)-2'deoksyguanozyna (CEdG) potencjalny biomarker cukrzycy

Głównym celem jest replikacja i walidacja testu CEdG do stosowania u ludzi. Opracowano w pełni zautomatyzowany test na obecność CEdG w moczu. badacze zweryfikują obserwacje poczynione na modelach zwierzęcych z cukrzycą u ludzi z cukrzycą typu 2 (T2DM) i bez niej. W szczególności badacze będą badać i ustalać między- i wewnątrztestowe współczynniki zmienności u ludzi.

Celem drugorzędnym jest określenie korelacji między poziomami CEdG i hemoglobiną A1c (HbA1c) u ludzi z T2DM a odpowiedzią na leczenie cukrzycowe oraz określenie związku CEdG z powikłaniami cukrzycowymi. Badacze zbadają związek CEdG z kontrolą glikemii na podstawie HbA1c, która jest obecnie złotym standardem, zarówno u pacjentów z cukrzycą typu 1, jak i typu 2. Badacze porównują również zmiany poziomów CEdG i Hb1Ac w odpowiedzi na leczenie cukrzycy u pacjentów z cukrzycą. Związek CEdG z powikłaniami cukrzycowymi będzie również badany u pacjentów z cukrzycą.

Względy statystyczne dla celu głównego:

Wielkość próby: ponieważ u ludzi istnieje znacznie więcej zmiennych, badacze obliczyli wielkość próby na podstawie znacznie bardziej konserwatywnego założenia niż to, co badacze zaobserwowali na modelach zwierzęcych z cukrzycą. Badacze planują badanie ciągłej zmiennej odpowiedzi od niezależnych osób kontrolnych i eksperymentalnych z 1 kontrolą na uczestnika eksperymentalnego. W oparciu o dane dotyczące zwierząt, badacze spodziewają się, że wyniki w każdej badanej grupie będą miały rozkład normalny z odchyleniem standardowym 0,3. Jeśli rzeczywista różnica średniej między grupami z cukrzycą i bez cukrzycy wynosi 0,5, badacze będą musieli zbadać 9 osób z cukrzycą i 9 osób bez cukrzycy, aby móc odrzucić hipotezę zerową, że średnie populacyjne grup eksperymentalnej i kontrolnej są równe z prawdopodobieństwem (potęgą) 0,9. Prawdopodobieństwo błędu typu I związane z tym testem tej hipotezy zerowej wynosi 0,05. Aby uwzględnić możliwy wskaźnik wyniszczenia wynoszący 30%, badacze włączą do badania 12 osób z cukrzycą i 12 osób bez cukrzycy.

Analiza statystyczna: Wpływ stanu cukrzycowego na poziomy CEdG w moczu zostanie porównany przy użyciu testu t-Studenta. Różnice w zmiennych ciągłych między grupami badanych będą testowane za pomocą jednoczynnikowej analizy ANOVA lub testu t-Studenta, jeśli to właściwe. Różnice w proporcjach zostaną ocenione za pomocą testu chi-kwadrat. Zmienne ciągłe, które nie przejdą testu normalności, zostaną przed analizą przekształcone logarytmicznie. Aby zbadać wpływ zmiennych zakłócających, zostanie zastosowana analiza regresji krokowej. Wartość p mniejsza niż 0,05 będzie uważana za istotną statystycznie.

Zgodnie z wytycznymi NIH dotyczącymi walidacji metod analitycznych dla biomarkerów stosowanych w opracowywaniu leków, dla małych cząsteczek, testy bioanalityczne, w których przebieg analityczny jest uznawany za ważny, gdy co najmniej 67% (4/6) kontroli jakości mieści się w 15% ich wartość nominalna. Spójność 6 powtórzonych przebiegów zostanie oceniona za pomocą testu Grubbsa pod kątem powtarzalności w obrębie każdego podmiotu. Ogólną spójność pomiarów CEdG można określić ilościowo na podstawie odsetka osób z 1+ zidentyfikowanymi wartościami odstającymi wśród 6 powtórzonych przebiegów. Aby uzyskać podstawowe oszacowanie spójności testu CEdG, badacze przyjmą liczbę tych sześciu pomiarów, które mieszczą się w granicach 15% średniej jako naszą miarę wyniku. Ostateczna walidacja biomarkera będzie wymagać ostatecznego ilościowego lub względnego podejścia ilościowego.

Względy statystyczne dla celu drugorzędnego:

Badacze dokonają regresji wartości y-var (HbA1c) uczestników badania względem x-var (CEdG). Wcześniejsze dane wskazują, że odchylenie standardowe x-var wynosi 0,15, a odchylenie standardowe błędów regresji wyniesie 0,15. Jeśli rzeczywiste nachylenie linii otrzymanej przez regresję y-var względem x-var wynosi 0,3, badacze będą musieli zbadać 89 osób, aby móc odrzucić hipotezę zerową, że to nachylenie jest równe zeru z prawdopodobieństwem (potęgą) 0,8. Prawdopodobieństwo błędu typu I związane z tym testem tej hipotezy zerowej wynosi 0,05. W związku z tym do badania zostanie zwerbowanych 100 osób, aby uwzględnić potencjalne zmniejszenie liczby osób.

Charakterystyka demograficzna i kliniczna pacjenta zostanie zestawiona w tabeli przy użyciu statystyki średniej, odchylenia standardowego, mediany, zakresu, liczby i procentu, jeśli to właściwe. Dane CEdG będą analizowane jako zmienna ciągła lub przekształcona dla zmierzonego poziomu ekspresji. Jednoczynnikowa korelacja między ekspresją CEdG a każdą ilościową miarą kliniczną zostanie oceniona przy użyciu korelacji Pearsona i jej 95% przedziału ufności. Trend czasowy w danych podłużnych i jego możliwe interakcje z innymi czynnikami ryzyka zostaną zbadane za pomocą wykresów pudełkowych, dopasowanych krzywych, uogólnionych modeli liniowych i uogólnionych równań szacunkowych, jeśli to konieczne. Szacowane korelacje między danymi CEdG a klinicznymi punktami końcowymi oraz ich możliwymi trendami czasowymi w okresie 12 miesięcy dostarczą cennych informacji przy wyborze pierwszorzędowego punktu końcowego i wielkości próby w przyszłych badaniach korelacji na większą skalę.