TÉCNICA DE CUANTIFICACIÓN DE ADN COMO HERRAMIENTA DE INTERPRETACIÓN EN ENFERMEDADES MITOCONDRIAS

2622/5000 Las enfermedades mitocondriales (MM) son las enfermedades metabólicas más comunes. Dado que estas patologías son muy heterogéneas en términos clínicos, solo la identificación de mutaciones en genes nucleares o en el ADN mitocondrial confirma el diagnóstico.

El estudio a gran escala de mtDNA mediante secuenciación de alto rendimiento (NGS) es un primer paso en el enfoque de diagnóstico. La reciente introducción de esta nueva y revolucionaria tecnología ha aumentado considerablemente la eficiencia de la identificación de mutaciones. Sin embargo, además de las mutaciones patogénicas conocidas, la NGS revela numerosas variantes cuyo significado se desconoce actualmente. Por lo tanto, un desafío importante para obtener un diagnóstico confiable es la interpretación del impacto clínico de estas nuevas variantes raras, que resulta muy difícil.

Los criterios de patogenicidad permiten clasificar las variantes de benignas a patógenas. Uno de los principales criterios de patogenicidad es una buena correlación del nivel heteroplásmico con la afectación tisular o celular. De hecho, las mutaciones del mtDNA son generalmente heteroplásmicas, lo que corresponde a la coexistencia de moléculas normales y mutadas en la misma célula o tejido, teniendo los tejidos más afectados una alta tasa de mutación. En una biopsia muscular de un paciente afectado, las fibras a menudo presentan una deficiencia enzimática de citocromo c oxidasa (COX-negativa) que puede demostrarse en inmunohistoquímica. El estudio de fibra única permite aislar las fibras deficientes y cuantificar la tasa heteroplásmica de una variante. La presencia de un alto nivel de heteroplasma en las fibras COX negativas, a diferencia de las fibras sin déficit, es un fuerte argumento a favor de la patogenicidad de esta variante. Actualmente, esta técnica no se utiliza de forma rutinaria en los laboratorios de diagnóstico, sino solo ocasionalmente en un marco de investigación en algunos laboratorios. Es una técnica pesada que consiste en una primera etapa de microdisección láser de las distintas fibras musculares seguida de una segunda etapa de cuantificación de la variante de cada fibra. Este segundo paso requiere un enfoque específico para cada variante identificada.

El objetivo de este estudio piloto es desarrollar una nueva técnica para la cuantificación de heteroplasmics de fibra única aislados por microdisección láser NGS. Esto, independientemente del tipo de variante, evitará los largos y costosos ajustes necesarios para cada nueva variante identificada y, por lo tanto, facilitará su uso.