Caracterización de biomarcadores microbianos, inmunitarios y epigenéticos para el tratamiento del trastorno depresivo mayor y la TEC

Todos los procedimientos serán aprobados por el comité de ética de ZIV Helsinki. Reclutamiento y evaluación clínica: se reclutarán 40 pacientes con MDD para este estudio, así como 20 participantes sanos de la misma edad (como grupo de control). Un psiquiatra no involucrado en el estudio evaluará la calificación de los pacientes para firmar el consentimiento informado. Tras la firma del consentimiento informado, se recogerán muestras de heces y sangre (20 ml) de todos los participantes para evaluar la composición microbiana y medir la inflamación y la expresión de proteínas en sangre. De acuerdo con la evaluación clínica de los pacientes con MDD diagnosticados, el psiquiatra recomendará el tratamiento con ISRS o TEC, y los pacientes se dividirán de acuerdo con el grupo de tratamiento. El estado clínico se evaluará mediante la escala de calificación de depresión de Hamilton (HAM-D) calificada por un psiquiatra en el punto de inicio (antes del tratamiento), después de 4 semanas de tratamiento (ya que los pacientes del grupo ECT reciben 8-12 tratamientos en promedio). Una disminución en la puntuación HAM-D se considerará una mejoría clínica que puede atribuirse al tratamiento. Los investigadores esperan una tasa de éxito del tratamiento de más del 50 % para la TEC según nuestra experiencia anterior. Los investigadores recolectarán muestras de sangre y heces de pacientes con MDD después de 4 semanas de tratamiento, repetirán las mediciones microbianas, de expresión de proteínas y de inflamación y las compararán con los resultados iniciales. Los datos adicionales registrados incluirán la edad, el IMC, el origen étnico, el uso previo de medicamentos y la cantidad de tratamientos con ECT o medicamentos actuales.

Criterios de inclusión: Pacientes con TDM con depresión estable diagnosticada clínicamente por un psiquiatra según la Escala de Depresión de Hamilton. La edad del paciente puede oscilar entre 18 y 80 años, ya que la depresión es más común en las personas mayores, representada por una mediana de edad de más de 55 años en la población tratada en el Ziv Medical Center.

Criterios de exclusión: Pacientes que recibieron antibióticos en los últimos 3 meses previos a la toma de muestras, pacientes que padecían enfermedades gastrointestinales crónicas u otras enfermedades crónicas como autoinmunes o cáncer, pacientes con comorbilidades como esquizofrenia.

Muestras de sangre: la sangre completa se centrifugará y las muestras de suero se mantendrán a -80 °C hasta el análisis para mediciones inflamatorias. Además, se purificarán los linfocitos, se extraerá el ARN y se realizará qRT-PCR para evaluar la expresión de proteínas y receptores inmunitarios (IL-1β, IL-1R1, IL-6, TNF-α, TNF1, TNF2), así como pruebas adicionales. proteínas relacionadas con MDD (p. receptor cannabinoide 1- CNR1, CD38, receptor de oxitocina- OXTR, factor neurotrófico derivado del cerebro - BDNF).

Medidas antiinflamatorias en el suero: mediremos los niveles de citocinas pro y antiinflamatorias mediante pruebas multiplex que incluyen IL-1, IL-6, IL-8, IL-10 y TNFα utilizando un kit Bio-Plex (Bio-Rad) . La placa de ensayo se leerá en un lector multiplex MAGPIX (Bio-Rad).

Muestras de heces: las muestras de heces se almacenarán dentro de las 4 horas desde la recolección a -80C hasta el procesamiento.

Análisis microbiano: el ADN microbiano se purificará de las heces y se generará una biblioteca de ARNr 16S con código de barras de cada sujeto a partir de la cual obtendremos ~300 000 lecturas por muestra utilizando la plataforma Illumina MiSeq (secuenciación NGS) en la Facultad de Medicina de la Universidad Bar Ilan . Las secuencias serán analizadas por QIIME. Además, se extraerá el ARN microbiano de las heces para probar la expresión génica microbiana mediante metatranscriptómica (secuenciación NGS).

Análisis estadístico: Todos los ensayos se realizarán utilizando el software estadístico SPSS versión 24 (SPSS Inc., Chicago, IL, EE. UU.).