Caratterizzazione dei biomarcatori microbici, immunitari ed epigenetici per il disturbo depressivo maggiore e il trattamento ECT

Tutte le procedure saranno approvate dal comitato etico ZIV Helsinki. Reclutamento e valutazione clinica: 40 pazienti affetti da MDD saranno reclutati per questo studio, oltre a 20 partecipanti sani di pari età (come gruppo di controllo). Uno psichiatra non coinvolto nello studio valuterà l'idoneità dei pazienti a firmare il consenso informato. Dopo la firma del consenso informato, verranno raccolti campioni di feci e sangue (20 ml) da tutti i partecipanti, per la valutazione della composizione microbica e le misurazioni del sangue dell'infiammazione e dell'espressione proteica. In base alla valutazione clinica dei pazienti con MDD diagnosticati, lo psichiatra raccomanderà il trattamento con SSRI o ECT e i pazienti saranno divisi in base al gruppo di trattamento. Lo stato clinico sarà valutato dalla Hamilton Depression Rating Scale (HAM-D) valutata da uno psichiatra al punto iniziale (prima del trattamento), dopo 4 settimane di trattamento (poiché i pazienti del gruppo ECT ricevono in media 8-12 trattamenti). Un abbassamento del punteggio HAM-D sarà considerato un miglioramento clinico che può essere attribuito al trattamento. Gli investigatori si aspettano un tasso di successo del trattamento superiore al 50% per ECT secondo la nostra esperienza passata. Gli investigatori raccoglieranno campioni di sangue e feci da pazienti affetti da MDD dopo 4 settimane di trattamento, ripeteranno misurazioni infiammatorie, di espressione proteica e microbiche e le confronteranno con i risultati iniziali. Ulteriori dati registrati includeranno età, indice di massa corporea, etnia, uso precedente di farmaci e numero di trattamenti ECT o farmaci attuali.

Criteri di inclusione: pazienti con disturbo depressivo maggiore con depressione stabile clinicamente diagnosticata da uno psichiatra secondo la Hamilton Depression Scale. L'età del paziente può variare tra i 18 e gli 80 anni, poiché la depressione è più comune nelle persone anziane, rappresentata da un'età media di oltre 55 anni nella popolazione trattata presso lo Ziv Medical Center.

Criteri di esclusione: pazienti che hanno ricevuto antibiotici negli ultimi 3 mesi prima del campionamento, pazienti affetti da malattie gastrointestinali croniche o altre malattie croniche come autoimmuni o cancro, pazienti con comorbidità come la schizofrenia.

Campioni di sangue: Il sangue intero sarà centrifugato ei campioni di siero saranno conservati a -80°C fino all'analisi per le misure infiammatorie. Inoltre, i linfociti saranno purificati, l'RNA sarà estratto e sarà eseguita la qRT-PCR per testare l'espressione delle proteine ​​immunitarie e dei recettori (IL-1β, IL-1R1, IL-6, TNF-α, TNF1, TNF2) così come ulteriori proteine ​​correlate alla MDD (ad es. recettore dei cannabinoidi 1- CNR1, CD38, recettore dell'ossitocina- OXTR, fattore neurotrofico derivato dal cervello - BDNF).

Misure infiammatorie nel siero: misureremo i livelli di citochine pro e antinfiammatorie mediante test multiplex tra cui IL-1, IL-6, IL-8, IL-10 e TNFα utilizzando un kit Bio-Plex (Bio-Rad) . La piastra del saggio sarà letta su un lettore multiplex MAGPIX (Bio-Rad).

Campioni di feci: i campioni di feci verranno conservati entro 4 ore dalla raccolta a -80C fino al trattamento.

Analisi microbica: il DNA microbico sarà purificato dalle feci e verrà generata una libreria di rRNA 16S con codice a barre da ciascun soggetto da cui otterremo ~ 300.000 letture per campione utilizzando la piattaforma Illumina MiSeq (sequenziamento NGS) presso la Facoltà di Medicina, Università di Bar Ilan . Le sequenze saranno analizzate da QIIME. Inoltre, l'RNA microbico sarà estratto dalle feci per testare l'espressione genica microbica tramite metatrascrittomica (sequenziamento NGS).

Analisi statistica: tutti i test saranno condotti utilizzando il software statistico SPSS versione 24 (SPSS Inc., Chicago, IL, USA).