Mikrobi-, immuuni- ja epigeneettisten biomarkkerien karakterisointi vakavaa masennusta ja ECT-hoitoa varten

Kaikki menettelyt tulee hyväksyä ZIV Helsingin eettisessä toimikunnassa. Rekrytointi ja kliininen arviointi: Tähän tutkimukseen rekrytoidaan 40 MDD-potilasta sekä 20 tervettä ikääntyvää osallistujaa (kontrolliryhmänä). Psykiatri, joka ei osallistu tutkimukseen, arvioi potilaiden kelpoisuuden allekirjoittaa tietoisen suostumuksen. Tietoisen suostumuksen allekirjoittamisen jälkeen kaikilta osallistujilta otetaan uloste- ja verinäytteitä (20 ml) mikrobikoostumuksen arviointia sekä tulehduksen ja proteiinin ilmentymisen mittaamista varten verestä. Diagnoosin saaneiden MDD-potilaiden kliinisen arvion mukaan psykiatri suosittelee SSRI- tai ECT-hoitoa ja potilaat jaetaan hoitoryhmiin. Kliininen tila arvioidaan Hamilton Depression Rating Scale (HAM-D) -asteikolla, jonka psykiatri pisteyttää aloituspisteessä (ennen hoitoa), 4 viikon hoidon jälkeen (koska ECT-ryhmän potilaat saavat keskimäärin 8-12 hoitoa). HAM-D-pisteiden aleneminen katsotaan kliiniseksi parannukseksi, joka voidaan johtua hoidosta. Tutkijat odottavat aiempien kokemustemme mukaan yli 50 % hoidon onnistumisasteen ECT:ssä. Tutkijat keräävät veri- ja ulostenäytteet MDD-potilailta 4 viikon hoidon jälkeen, toistavat tulehdus-, proteiiniekspressio- ja mikrobimittaukset ja vertaavat niitä alkuperäisiin tuloksiin. Tallennetut lisätiedot sisältävät iän, BMI:n, etnisyyden, aiemman lääkityksen käytön sekä ECT-hoitojen tai nykyisen lääkityksen määrän.

Sisällytämiskriteerit: MDD-potilaat, joilla on stabiili masennus, jonka psykiatri on kliinisesti diagnosoinut Hamiltonin masennusasteikon mukaan. Potilaan ikä voi vaihdella 18-80 vuoden välillä, koska masennus on yleisempää iäkkäillä ihmisillä, mitä edustaa yli 55-vuotiaan mediaani-ikä hoidetussa väestössä Ziv Medical Centerissä.

Poissulkemiskriteerit: Potilaat, jotka ovat saaneet antibiootteja viimeisten 3 kuukauden aikana ennen näytteenottoa, potilaat, jotka kärsivät kroonisista maha-suolikanavan sairauksista tai muista kroonisista sairauksista, kuten autoimmuunisairaudesta tai syövästä, potilaat, joilla on muita sairauksia, kuten skitsofrenia.

Verinäytteet: Kokoveri sentrifugoidaan ja seeruminäytteitä pidetään -80 C:ssa tulehdusmittausten analysointiin asti. Lisäksi lymfosyytit puhdistetaan, RNA uutetaan ja qRT-PCR suoritetaan immuuniproteiinin ja reseptorin ilmentymisen (IL-1β, IL-1R1, IL-6, TNF-α, TNF1, TNF2) testaamiseksi sekä muita lisäaineita. MDD:hen liittyvät proteiinit (esim. kannabinoidireseptori 1 - CNR1, CD38, oksitosiinireseptori - OXTR, aivoista peräisin oleva neurotrofinen tekijä - BDNF).

Tulehdusmittaukset seerumissa: Mittaamme pro- ja anti-inflammatoristen sytokiinien tasoja multipleksitesteillä, mukaan lukien IL-1, IL-6, IL-8, IL-10 ja TNFα käyttämällä Bio-Plex-sarjaa (Bio-Rad) . Määrityslevy luetaan MAGPIX-multipleksilukijalla (Bio-Rad).

Ulostenäytteet: Ulostenäytteet säilytetään 4 tunnin sisällä keräämisestä -80 C:ssa käsittelyyn asti.

Mikrobianalyysi: Mikrobi-DNA puhdistetaan ulosteesta ja jokaisesta koehenkilöstä luodaan viivakoodattu 16S-rRNA-kirjasto, josta saamme ~300 000 lukemaa näytettä kohti Illumina MiSeq -alustan (NGS-sekvensointi) avulla Bar Ilanin yliopiston lääketieteellisessä tiedekunnassa. . QIIME analysoi sekvenssit. Lisäksi mikrobi-RNA uutetaan ulosteesta mikrobigeenin ilmentymisen testaamiseksi metatranskriptomiikan (NGS-sekvensoinnin) avulla.

Tilastollinen analyysi: Kaikki määritykset suoritetaan käyttämällä tilastoohjelmistoa SPSS version 24 (SPSS Inc., Chicago, IL, USA).