Mikrobiális, immun- és epigenetikai biomarkerek jellemzése major depressziós zavarokhoz és ECT kezeléshez

Minden eljárást a ZIV Helsinki etikai bizottsága hagy jóvá. Toborzás és klinikai értékelés: 40 MDD-beteget vesznek fel ebbe a vizsgálatba, valamint 20 egészséges korú résztvevőt (kontrollcsoportként). A vizsgálatban részt nem vevő pszichiáter értékeli a betegek alkalmasságát a tájékozott beleegyezés aláírására. A beleegyező nyilatkozat aláírását követően széklet- és vérmintákat (20 ml) vesznek minden résztvevőtől a mikrobiális összetétel értékeléséhez, valamint a gyulladás és a fehérje expresszió vérméréséhez. A diagnosztizált MDD betegek klinikai értékelése alapján a pszichiáter SSRI vagy ECT kezelést javasol, és a betegeket kezelési csoportok szerint osztják fel. A klinikai állapotot a Hamilton Depresszió Értékelő Skála (HAM-D) fogja értékelni, amelyet egy pszichiáter pontoz a kiindulási pontnál (a kezelés előtt), 4 hét kezelés után (mivel az ECT-csoportú betegek átlagosan 8-12 kezelést kapnak). A HAM-D pontszám csökkenése klinikai javulásnak minősül, amely a kezelésnek tulajdonítható. A kutatók korábbi tapasztalataink szerint 50% feletti sikeres kezelési arányt várnak az ECT esetében. A kutatók 4 hetes kezelés után vér- és székletmintákat gyűjtenek az MDD-betegektől, megismétlik a gyulladásos, fehérjeexpressziós és mikrobiális méréseket, és összehasonlítják azokat a kezdeti eredményekkel. A további rögzített adatok közé tartozik az életkor, a BMI, az etnikai hovatartozás, a korábbi gyógyszerhasználat, valamint az ECT-kezelések vagy a jelenlegi gyógyszeres kezelések száma.

Bevételi kritériumok: stabil depresszióban szenvedő MDD-s betegek, akiket pszichiáter klinikailag diagnosztizált a Hamilton-depressziós skála szerint. A betegek életkora 18 és 80 év között változhat, mivel a depresszió gyakrabban fordul elő idősebb embereknél, amit a Ziv Medical Center kezelt populációjában 55 év feletti medián életkor képvisel.

Kizárási kritériumok: A mintavételt megelőző 3 hónapban antibiotikumot kapó betegek, krónikus gyomor-bélrendszeri betegségekben vagy egyéb krónikus betegségekben, például autoimmun vagy rákbetegségben szenvedő betegek, társbetegségben, például skizofréniában szenvedő betegek.

Vérminták: A teljes vért centrifugálják, és a szérummintákat -80 C-on tartják a gyulladásos mérések elemzéséig. Ezenkívül megtisztítják a limfocitákat, extrahálják az RNS-t, és qRT-PCR-t végeznek az immunfehérje- és receptorexpresszió (IL-1β, IL-1R1, IL-6, TNF-α, TNF1, TNF2), valamint további vizsgálatok céljából. MDD-vel kapcsolatos fehérjék (pl. kannabinoid receptor 1 – CNR1, CD38, oxitocin receptor – OXTR, agyi eredetű neurotróf faktor – BDNF).

Gyulladásos mérések a szérumban: Megmérjük a pro és gyulladásgátló citokinek szintjét multiplex tesztekkel, beleértve az IL-1-et, IL-6-ot, IL-8-at, IL-10-et és TNFα-t Bio-Plex kit (Bio-Rad) segítségével. . A vizsgálati lemezt MAGPIX multiplex olvasón (Bio-Rad) olvassuk le.

Székletminták: a székletmintákat a gyűjtéstől számított 4 órán belül -80 C-on tárolják a feldolgozásig.

Mikrobaelemzés: A mikrobiális DNS-t megtisztítják a székletből, és minden alanyból vonalkódos 16S rRNS könyvtárat állítanak elő, amelyből mintánként ~300 000 leolvasást kapunk az Illumina MiSeq platform (NGS szekvenálás) segítségével a Bar Ilan Egyetem Orvostudományi Karán. . A szekvenciákat a QIIME elemzi. Ezenkívül a mikrobiális RNS-t kivonják a székletből, hogy teszteljék a mikrobiális génexpressziót metatranszkriptomika (NGS szekvenálás) segítségével.

Statisztikai elemzés: Minden vizsgálatot az SPSS 24-es verziójú statisztikai szoftverrel (SPSS Inc., Chicago, IL, USA) végeznek.