Charakterizace mikrobiálních, imunitních a epigenetických biomarkerů pro těžkou depresivní poruchu a léčbu ECT

Všechny postupy budou schváleny etickou komisí ZIV Helsinki. Nábor a klinické hodnocení: Do této studie bude přijato 40 pacientů s MDD a také 20 zdravých účastníků stejného věku (jako kontrolní skupina). Psychiatr, který není zapojen do studie, posoudí kvalifikaci pacientů pro podpis informovaného souhlasu. Po podepsání informovaného souhlasu budou všem účastníkům odebrány vzorky stolice a krve (20 ml) pro posouzení mikrobiálního složení a měření zánětu a exprese proteinů v krvi. Podle klinického posouzení diagnostikovaných pacientů s MDD doporučí psychiatr léčbu SSRI nebo ECT a pacienti budou rozděleni podle léčebné skupiny. Klinický stav bude hodnocen pomocí Hamiltonovy škály pro hodnocení deprese (HAM-D) hodnocené psychiatrem na začátku (před léčbou), po 4 týdnech léčby (protože pacienti ve skupině ECT dostávají v průměru 8–12 léčebných terapií). Snížení skóre HAM-D bude považováno za klinické zlepšení, které lze přičíst léčbě. Podle našich minulých zkušeností vyšetřovatelé očekávají u ECT míru úspěšnosti léčby přes 50 %. Vyšetřovatelé odeberou vzorky krve a stolice od pacientů s MDD po ​​4 týdnech léčby, zopakují zánětlivá měření, měření proteinové exprese a mikrobiální měření a porovnají je s počátečními výsledky. Další zaznamenané údaje budou zahrnovat věk, BMI, etnický původ, předchozí užívání léků a počet ECT ošetření nebo současnou medikaci.

Kritéria zařazení: pacienti s MDD se stabilní depresí klinicky diagnostikovaní psychiatrem podle Hamiltonovy škály deprese. Věk pacientů se může pohybovat mezi 18-80 lety, protože deprese je častější u starších lidí, což představuje střední věk nad 55 let v léčené populaci v Ziv Medical Center.

Kritéria vyloučení: Pacienti užívající antibiotika v posledních 3 měsících před odběrem vzorků, pacienti trpící chronickými gastrointestinálními onemocněními nebo jinými chronickými onemocněními, jako je autoimunitní nebo rakovina, pacienti s komorbiditami, jako je schizofrenie.

Vzorky krve: Plná krev se odstředí a vzorky séra se udržují při -80 °C až do analýzy zánětlivých měření. Kromě toho budou purifikovány lymfocyty, bude extrahována RNA a bude provedena qRT-PCR k testování exprese imunitního proteinu a receptoru (IL-1β, IL-1R1, IL-6, TNF-α, TNF1, TNF2) a dalších proteiny související s MDD (např. kanabinoidní receptor 1- CNR1, CD38, oxytocinový receptor- OXTR, neurotrofický faktor odvozený z mozku - BDNF).

Zánětlivá opatření v séru: Změříme hladiny pro a protizánětlivých cytokinů multiplexními testy včetně IL-1, IL-6, IL-8, IL-10 a TNFα pomocí soupravy Bio-Plex (Bio-Rad) . Testovací destička bude odečtena na multiplexní čtečce MAGPIX (Bio-Rad).

Vzorky stolice: vzorky stolice budou uchovávány do 4 hodin od odběru při -80C až do zpracování.

Mikrobiální analýza: Mikrobiální DNA bude purifikována ze stolice a od každého subjektu bude vytvořena knihovna 16S rRNA s čárovým kódem, ze které získáme ~300 000 čtení na vzorek pomocí platformy Illumina MiSeq (NGS sekvenování) na Lékařské fakultě Univerzity Bar Ilan . Sekvence budou analyzovány pomocí QIIME. Kromě toho bude ze stolice extrahována mikrobiální RNA za účelem testování exprese mikrobiálních genů prostřednictvím metatranskriptomiky (NGS sekvenování).

Statistická analýza: Všechny testy budou provedeny pomocí statistického softwaru SPSS verze 24 (SPSS Inc., Chicago, IL, USA).