Caracterização de Biomarcadores Microbianos, Imunes e Epigenéticos para Transtorno Depressivo Maior e Tratamento de ECT

Todos os procedimentos serão aprovados pelo comitê de ética do ZIV Helsinki. Recrutamento e avaliação clínica: 40 pacientes com MDD serão recrutados para este estudo, bem como 20 participantes saudáveis ​​da mesma idade (como um grupo de controle). Um psiquiatra não envolvido no estudo avaliará a qualificação dos pacientes para assinar o consentimento informado. Após a assinatura do consentimento informado, amostras de fezes e sangue (20 ml) serão coletadas de todos os participantes, para avaliação da composição microbiana, e medidas sanguíneas de inflamação e expressão de proteínas. De acordo com a avaliação clínica dos pacientes diagnosticados com TDM, o psiquiatra recomendará o tratamento com ISRS ou ECT, e os pacientes serão divididos de acordo com o grupo de tratamento. O estado clínico será avaliado pela Escala de Avaliação de Depressão de Hamilton (HAM-D) pontuada por um psiquiatra no ponto de partida (antes do tratamento), após 4 semanas de tratamento (já que os pacientes do grupo ECT recebem 8-12 tratamentos em média). Uma diminuição no escore HAM-D será considerada melhora clínica que pode ser atribuída ao tratamento. Os investigadores esperam uma taxa de sucesso do tratamento de mais de 50% para ECT de acordo com nossa experiência anterior. Os investigadores irão coletar amostras de sangue e fezes de pacientes com MDD após 4 semanas de tratamento, repetir inflamatórias, expressão de proteínas e medições microbianas e compará-las com os resultados iniciais. Dados adicionais registrados incluirão idade, IMC, etnia, uso anterior de medicamentos e número de tratamentos de ECT ou medicamentos atuais.

Critérios de inclusão: pacientes MDD com depressão estável diagnosticados clinicamente por um psiquiatra de acordo com a Escala de Depressão de Hamilton. A idade do paciente pode variar entre 18 e 80 anos, já que a depressão é mais comum em idosos, representada por uma idade média de mais de 55 anos na população tratada no Ziv Medical Center.

Critérios de exclusão: Pacientes que receberam antibióticos nos últimos 3 meses antes da amostragem, pacientes que sofrem de doenças gastrointestinais crônicas ou outras doenças crônicas, como autoimunes ou câncer, pacientes com comorbidades, como esquizofrenia.

Amostras de sangue: O sangue total será centrifugado e as amostras de soro serão mantidas a -80C até a análise para dosagens inflamatórias. Além disso, os linfócitos serão purificados, o RNA será extraído e o qRT-PCR será realizado para testar a expressão de proteínas imunes e receptores (IL-1β, IL-1R1, IL-6, TNF-α, TNF1, TNF2), bem como proteínas relacionadas com MDD (por ex. receptor canabinóide 1- CNR1, CD38, receptor de oxitocina- OXTR, fator neurotrófico derivado do cérebro - BDNF).

Medidas inflamatórias no soro: Mediremos os níveis de citocinas pró e anti-inflamatórias por testes multiplex incluindo IL-1, IL-6, IL-8, IL-10 e TNFα usando um kit Bio-Plex (Bio-Rad) . A placa de ensaio será lida em um leitor multiplex MAGPIX (Bio-Rad).

Amostras de fezes: as amostras de fezes serão armazenadas dentro de 4 horas desde a coleta a -80C até o processamento.

Análise microbiana: o DNA microbiano será purificado das fezes e uma biblioteca de 16S rRNA com código de barras de cada indivíduo será gerada a partir da qual obteremos ~ 300.000 leituras por amostra usando a plataforma Illumina MiSeq (sequenciamento NGS) na Faculdade de Medicina da Universidade Bar Ilan . As sequências serão analisadas pela QIIME. Adicionalmente, o RNA microbiano será extraído das fezes para testar a expressão gênica microbiana via metatranscriptômica (sequenciamento NGS).

Análise estatística: Todos os ensaios serão conduzidos usando o software estatístico SPSS versão 24 (SPSS Inc., Chicago, IL, EUA).