Comportamiento de autolesión entre los adolescentes de mayor riesgo (SH-MARA)

DESCRIPCIÓN DEL PROYECTO DE INVESTIGACIÓN "Influencias y prevención de las conductas autolesivas en los adolescentes de mayor riesgo".

1. Antecedentes científicos Detallado en el Protocolo de Estudio adjunto
2. Descripción detallada del programa de trabajo 2.1. Contenido y programa de trabajo El estudio incluirá una muestra de aproximadamente 200 jóvenes que serán hospitalizados por riesgo de suicidio (el mayor riesgo en Eslovenia) y un número aproximadamente igual de adolescentes sanos. En el momento de la inscripción, los investigadores evaluarán la presencia de varios factores mediante la revisión de datos demográficos, diagnósticos clínicos, cuestionarios de autoevaluación, evaluación social, pruebas psicológicas clínicas, escalas de calificación y muestras de sangre para análisis genéticos. Realizarán un seguimiento longitudinal de los eventos autoagresivos y heteroagresivos en los pacientes durante la hospitalización y mantendrán un registro continuo de los mismos. Los factores de riesgo y protección de los adolescentes con mayor riesgo se compararán con un grupo de control de adolescentes sanos. Los mismos factores en los adolescentes de mayor riesgo serán reevaluados a los 6 y 18 meses de tratamiento. En la Figura 2 y la Tabla 2 del Protocolo del estudio se proporciona una descripción detallada del diseño del estudio.

2.2. Sujetos: Los sujetos con criterios de inclusión y exclusión se describen en la Tabla 2 (Protocolo de estudio, WP2).

2.3. Métodos: 2.3.1. Cuestionarios y herramientas de psicodiagnóstico:

1. Cuestionario de inscripción, Cuestionario general1, Cuestionario general2, Cuestionario general3: Los cuestionarios cubrirán datos generales y demográficos, información sobre tratamientos previos, medicación recibida, trastorno mental al alta (ICD), situaciones psicosociales (ICD), enfermedades físicas (ICD), COVID (vacunados, recuperados, probados), uso de sustancias psicoactivas, antecedentes de autolesiones, intentos de suicidio, rendimiento escolar, experiencia con pares, orientación e identidad sexual, residencia, composición familiar, antecedentes familiares de trastornos mentales, autolesiones y intentos de suicidio
2. Escala de Evaluación de la Gravedad del Suicidio de Columbia (CSSRS)75.
3. La herramienta breve de evaluación de autolesiones no suicidas (B-NSSI-AT)76.
4. Inventario de Evaluación de la Personalidad-Adolescente (PAI-A) (https://www.center-pds.si/Katalogtestov/Kliničnitesti/Vprašalnikzaocenoosebnosti-oblikazamladostnike-PAI-A.aspx).
5. Lista de verificación de síntomas de trauma para niños (TSCC) (https://www.center-pds.si/Katalogtestov/Kliničnitesti/Vprašalnikotravmatiziranostiotrokinmladostnik. aspx).
6. Experiencias en Relaciones Cercanas-Estructuras de Relación (ECR-RS)77,78
7. Evaluación Dinámica de la Agresión Situacional-Versión Juvenil (DASA-YV)79.
8. Escala de riesgo de autoagresión para adolescentes (ASHRS): esta es la escala que desarrollamos para el presente estudio.
9. El Nivel de Funcionamiento de la Personalidad Scale-Brief Form 2.0 (LPFSBF 2.0) 80.
10. Cuestionario de incidencia de eventos traumáticos a lo largo de la vida (LITE)81, 82.
11. Escala de Rasgos Límite de la Personalidad (BPFSC-11)83.
12. Inventario de Declaraciones sobre Autolesión (ISAS)84.

2.3.2. Métodos genéticos: Aislamiento de ADN: El ADN genómico se aislará de acuerdo con el protocolo de laboratorio establecido utilizando el kit de ADN FlexGene (Qiagen Alemania) y una muestra de sangre con EDTA de 5 ml. El ADN aislado se almacenará a 4 °C.

Secuenciación: la secuenciación se realizará con la tecnología de secuenciación de lectura larga interna disponible nanopore PromethION (Oxford Nanopore Technologies). La capacidad de detectar modificaciones de ADN a través de diferencias en la intensidad de la corriente eléctrica producida a partir de una lectura de nanoporos de una base no modificada y de una base modificada, permite la detección de la metilación del ADN en diferentes CpG del ADN natural humano a nivel de todo el epigenoma.

Las bibliotecas se prepararán utilizando el kit de secuenciación de ligadura (SQK-LSK 109, Oxford Nanopore Technologies) en las siguientes etapas: 1. Reparación de NEBNext Ultra II End / dA-tailing, 2. ligadura de los códigos de barras nativos, 3. ligadura de los adaptadores de secuenciación, 4 cebado de celdas de flujo y carga de bibliotecas de ADN (Kit de cebado de celdas de flujo, Oxford Nanopore Technologies).

El análisis se llevará a cabo utilizando el ADN de los participantes con código de barras, lo que permitirá el análisis simultáneo de múltiples participantes, agrupando la cantidad equimolar de ADN en un solo grupo, en función de los grupos de observación. La combinación de muestras reducirá el efecto de la variabilidad del epigenoma individual y enriquecerá las señales epigenéticas específicas de la cohorte, potencialmente asociadas con el fenotipo clínico.

Llamada de base bioinformática: a partir de la señal de secuenciación sin procesar, las secuencias de nucleótidos se determinarán utilizando la herramienta de software Guppy85, que se basa en un modelo de red neuronal predictivo. Las lecturas identificadas y su confiabilidad se almacenarán en archivos FASTQ. Para alineaciones posteriores de lecturas largas, se utilizará como referencia el genoma humano (GRCh38).

Llamada de variantes: el software Megalodon (Oxford Nanopore Technologies) se utilizará para determinar las secuencias de nucleótidos a partir de la señal sin procesar, la alineación de las lecturas en el genoma de referencia humano y la llamada de variantes. La confiabilidad de los hallazgos se confirmará adicionalmente utilizando la herramienta de software Medaka (Oxford Nanopore Technologies). La herramienta utiliza un modelo de red neuronal para identificar variantes genéticas, basándose en secuencias de consenso construidas. Los datos de las variantes se almacenarán en archivos VCF.

Cuantificación y evaluación de repeticiones cortas en tándem: se usarán genotipos en tándem86 y STRique87 para detectar cambios en la longitud de las repeticiones en tándem, a partir de lecturas de ADN largas alineadas. Además de la entrada de lecturas alineadas, la herramienta de software STRique acepta la señal de secuenciación sin procesar, según la cual un modelo oculto de Markov cuantifica y evalúa la probabilidad de un cambio. Los cambios validados en la longitud de las repeticiones en tándem se almacenarán en archivos TSV.

Detección de sitios de metilación: se utilizarán diferentes herramientas de llamada de metilación utilizando la herramienta de software METEORE88. La fiabilidad de las islas CpG metiladas encontradas en los resultados se demostrará mediante los modelos de predicción (bosque aleatorio y regresión lineal múltiple). Además, los sitios metilados detectados se compararán con los resultados del software Remora (Oxford Nanopore Technologies). Las ubicaciones de los sitios de metilación confiables se almacenarán en archivos BED y TSV.

2.4. Realización de la investigación "Influencias y prevención de las conductas autolesivas entre los adolescentes de mayor riesgo" El proceso detallado de la encuesta se describe en la Figura 2 y la Tabla 2 del Protocolo de estudio.

Definición detallada de los paquetes de trabajo de la investigación "Influencias y prevención de las conductas autolesivas entre los adolescentes de mayor riesgo".

2.4.1. WP 1: Establecimiento de un módulo de investigación en funcionamiento sobre "Influencias y prevención del comportamiento de autolesión entre los adolescentes de mayor riesgo".

Organización líder: Universidad de Ljubljana, Facultad de Medicina y Centro de Salud Mental, Clínica Psiquiátrica Universitaria de Ljubljana (UPKL) Organizaciones participantes: el Instituto Clínico de Diagnósticos Especiales de Laboratorio de la Clínica Pediátrica de la UKC Ljubljana (KISLD) y la Facultad de Ingeniería Eléctrica , Ciencias de la Computación e Informática de la Universidad de Maribor (FERI) T1: En esta etapa, todos los cuestionarios se prepararon en conjuntos con los números de encuesta correspondientes.

1. Kit de inscripción (cuestionario de selección, CSSRS, B-NSSI-AT)
2. Kit Time1 (Cuestionario general1, PAI-A, TSCC, ECR-RS, DASA-YV, ASHRS, LPFSBF 2.0, LITE, BPFSC-11, ISAS), toma de muestras de sangre venosa para análisis genéticos
3. Kit Time2 (Rastreo DASA-YV, Informe de Incidentes (cometidos y evitados), Cuestionario General2)
4. Kit Time3 (Cuestionario General3, CSSRS, B-NSSI-AT, subescalas PAI-A, subescalas TSCC, ECR-RS, DASA-YV, ASHRS, LPFSBF 2.0, LITE, BPFSC-11), toma de muestras de sangre venosa para análisis genéticos.

T2: Desarrollo de un protocolo para inscripción de sujetos y adquisición, almacenamiento y análisis de datos. Este trabajo incluyó la preparación de materiales de información para sujetos y padres/tutores, consentimientos/asentimientos informados y un protocolo detallado que estará accesible para los investigadores a lo largo del estudio.

T3: Preparación del sistema de ingreso y almacenamiento de datos: El sistema de información de ingreso y almacenamiento de datos se preparará de modo que permita el ingreso de datos a través de plantillas preparadas previamente para el informe inicial e intermedio de las mediciones. El sistema garantizará la privacidad de los datos, ya que el acceso estará restringido a los datos anónimos y solo se permitirá con fines de análisis (en línea con el Reglamento General de Protección de Datos (UE) 2016/679 (GDPR)). El sistema se asegurará de que los datos se eliminen de forma segura después de que se complete el proyecto (de acuerdo con el RGPD). El sistema de información estará ubicado físicamente en la República de Eslovenia, y el acceso físico al hardware estará limitado solo a actividades administrativas por parte de personal calificado.

T4: Educación y capacitación del grupo de trabajo: Esta parte constará de varias sesiones educativas para los diferentes miembros del grupo de trabajo: a. Implicación de los pacientes, implicación de los alumnos y alumnas del grupo control (evaluación del cumplimiento de los criterios de inclusión/exclusión, información sobre el estudio, obtención del consentimiento de los adolescentes y familiares), b. Recopilación de respuestas al cuestionario, c. Recogida de muestras biológicas, d. Recogida de datos durante la hospitalización, p. Hacer un seguimiento. Las sesiones de formación inicial serán seguidas por un seguimiento más frecuente de los procesos de estudio, posibles complicaciones, ajustes necesarios del protocolo de acuerdo con la experiencia inicial (jefe de proyecto Maja Drobnič Radobuljac) y reentrenamiento si es necesario.

2.4.2. WP 2: Reclutamiento de grupos de estudio y control, recopilación de datos, seguimiento de pacientes.

Organización líder: UPKL Organizaciones participantes: KISLD y FERI

Objetivos:

En este paquete de trabajo, los investigadores se centrarán en la participación de pacientes y adolescentes sanos. El paquete de trabajo incluye la captura de todos los datos de los pacientes en el Tiempo 1 y el seguimiento de los pacientes durante la hospitalización hasta el alta (Tiempo 2) y la recuperación de datos en el Tiempo 3 (Figura 2 del Protocolo de estudio). En el lado del grupo de control, solo se capturarán los datos en el Momento 1 (Figura 2 del Protocolo de estudio). Este paquete de trabajo tiene tres objetivos principales: inscripción de adolescentes hospitalizados y sanos, recolección de datos y seguimiento.

Tareas:

T1: Matrícula de adolescentes hospitalizados. Se administrarán el kit de inscripción y el kit Time1 (consulte la figura 2 del protocolo del estudio), y el kit Time2 se administrará durante la hospitalización y al alta.

T2: Matrícula de adolescentes sanos (grupo control). Se administrarán el Kit de inscripción y el Kit de tiempo1 (consulte la Figura 2 del Protocolo del estudio).

T3: Recogida de datos. Los datos de los pacientes hospitalizados se recopilarán mediante la administración de los kits Enrollment, Time1, Time2 (consulte la Figura 2 del Protocolo del estudio). A los adolescentes del grupo de control se les administrarán los kits Inscripción y Tiempo1 inmediatamente después de la inscripción, no se recopilarán otros datos de estos adolescentes (consulte la Figura 2 del Protocolo del estudio). En el caso de que alguno de los adolescentes abordados parezca necesitar ayuda por conducta autolesiva u otros trastornos mentales manifiestos, será derivado para recibir el tratamiento adecuado.

T4: Seguimiento. Seis y 18 meses después de finalizada la hospitalización, los investigadores contactarán nuevamente a los pacientes y administrarán el kit Time3 (ver Figura 2 del Protocolo de Estudio). Si alguno de los adolescentes abordados parece necesitar ayuda por conducta autolesiva u otros trastornos mentales manifiestos, será derivado para recibir el tratamiento adecuado.

2.4.3. WP 3: Análisis de materiales extraídos, entrada de datos y análisis estadístico Organización líder: UPKL, KISLD y FERI Organizaciones participantes: UPKL, KISLD y FERI

Objetivos:

El primer objetivo es identificar los factores que influyen en la aparición de las formas más amenazantes de comportamiento auto agresivo en adolescentes.

El segundo objetivo es evaluar los factores que influyen en el cambio de comportamiento de riesgo de autolesión en los adolescentes de mayor riesgo.

El tercer objetivo es desarrollar un instrumento (escala) para la evaluación rápida del riesgo de autolesiones en adolescentes a corto y mediano plazo (ASHRS).

Los detalles están en el Protocolo de estudio.