Önkárosító magatartás a leginkább veszélyeztetett serdülők körében (SH-MARA)

„Az önkárosító magatartás hatásai és megelőzése a leginkább veszélyeztetett serdülőkorúak körében” KUTATÁSI PROJEKT LEÍRÁSA.

1. Tudományos háttér Részletek a mellékelt tanulmányi jegyzőkönyvben
2. A munkaprogram részletes leírása 2.1. Tartalom és munkaprogram A tanulmány körülbelül 200 fiatalból álló mintát fog tartalmazni, akiket öngyilkossági kockázat miatt kórházba kell szállítani (Szlovéniában a legveszélyeztetettebb), és körülbelül ugyanennyi egészséges serdülőt. A beiratkozáskor a vizsgálók demográfiai adatok, klinikai diagnózis, önértékelő kérdőívek, szociális értékelés, klinikai pszichológiai tesztek, minősítési skálák és a genetikai analízishez szükséges vérminta áttekintésével értékelik több tényező jelenlétét. Longitudinálisan nyomon követik az autoagresszív és heteroagresszív eseményeket a betegekben a kórházi kezelés során, és folyamatos nyilvántartást vezetnek róluk. A leginkább veszélyeztetett serdülők kockázati és védőfaktorait egy egészséges serdülőkből álló kontrollcsoporthoz hasonlítják. A leginkább veszélyeztetett serdülőknél ugyanezeket a tényezőket 6 és 18 hónapos kezelés után újraértékelik. A vizsgálati terv részletes leírását a vizsgálati protokoll 2. ábrája és 2. táblázata tartalmazza.

2.2. Alanyok: A felvételi és kizárási kritériumokkal rendelkező alanyokat a 2. táblázat (Study Protocol, WP2) írja le.

2.3. Módszerek: 2.3.1. Kérdőívek és pszichodiagnosztikai eszközök:

1. Beiratkozási kérdőív, Általános kérdőív1, Általános kérdőív2, Általános kérdőív 3: A kérdőívek általános és demográfiai adatokra, korábbi kezelésekre, kapott gyógyszerekre, elbocsátáskori mentális zavarokra (ICD), pszichoszociális helyzetekre (ICD), testi betegségekre (ICD), COVID-re vonatkoznak. státusz (oltott, felépült, tesztelt), pszichoaktív szerek használata, önkárosító kórtörténet, öngyilkossági kísérlet, iskolai teljesítmény, társaikkal kapcsolatos tapasztalat, szexuális irányultság és identitás, lakóhely, család összetétele, a családban előfordult mentális zavar, önsértés és öngyilkossági kísérletek.
2. Columbia öngyilkossági súlyossági besorolási skála (CSSRS)75.
3. A rövid, nem öngyilkos önsérülést értékelő eszköz (B-NSSI-AT)76.
4. Personality Assessment Inventory-Adolescent (PAI-A) (https://www.center-pds.si/Katalogtestov/Kliničnitesti/Vprašalnikzaocenoosebnosti-oblikazamladostnike-PAI-A.aspx).
5. Trauma Symptom Checklist for Children (TSCC) (https://www.center-pds.si/Katalogtestov/Kliničnitesti/Vprašalnikotravmatiziranostiotrokinmladostnik. aspx).
6. Tapasztalatok a közeli kapcsolatok-kapcsolati struktúrák terén (ECR-RS)77,78
7. A szituációs agresszió dinamikus értékelése – Ifjúsági verzió (DASA-YV)79.
8. A serdülők önkárosító kockázati skála (ASHRS): ezt a skálát dolgoztuk ki a jelen tanulmányhoz.
9. A Level of Personality Functioning Scale-Brief Form 2.0 (LPFSBF 2.0) 80.
10. Lifetime Incidence of Traumatic Events kérdőív (LITE)81, 82.
11. Borderline Personality Features Skála (BPFSC-11)83.
12. Az önsérülésről szóló nyilatkozatok jegyzéke (ISAS)84.

2.3.2. Genetikai módszerek: DNS izolálás: A genomiális DNS izolálása a megállapított laboratóriumi protokoll szerint FlexGene DNS kit (Qiagen Germany) és 5 ml EDTA-vérminta felhasználásával történik. Az izolált DNS-t 4 °C-on tároljuk.

Szekvenálás: A szekvenálást a rendelkezésre álló házon belüli PromethION (Oxford Nanopore Technologies) nanopórusos szekvenálási technológia segítségével hajtják végre. A módosítatlan bázis és egy módosított bázis nanopórusainak leolvasásából származó elektromos áram intenzitásbeli különbségein keresztül történő DNS-módosítások detektálása lehetővé teszi a DNS-metiláció kimutatását az emberi természetes DNS-ből származó különböző CpG-kben az epigenom-szinten.

A könyvtárakat ligációs szekvenáló készlettel (SQK-LSK 109, Oxford Nanopore Technologies) készítik el a következő szakaszokban: 1. NEBNext Ultra II End javítás / dA-farok, 2. natív vonalkódok ligálása, 3. szekvenáló adapterek ligálása, 4 áramlási sejtek beindítása és DNS-könyvtár betöltése (Flow Cell Priming Kit, Oxford Nanopore Technologies).

Az elemzés a résztvevők vonalkódos DNS-ének felhasználásával történik, amely lehetővé teszi több résztvevő egyidejű elemzését, az ekvimoláris mennyiségű DNS-t egyetlen poolba egyesítve, a megfigyelési csoportok alapján. A mintagyűjtés csökkenti az egyéni epigenom variabilitás hatását, és gazdagítja a kohorsz-specifikus epigenetikai jeleket, amelyek potenciálisan a klinikai fenotípushoz kapcsolódnak.

Bioinformatikai bázishívás: A nyers szekvenáló jelből a nukleotidszekvenciákat a Guppy85 szoftvereszköz segítségével határozzák meg, amely prediktív neurális hálózati modellen alapul. Az azonosított leolvasásokat és azok megbízhatóságát FASTQ fájlokban tároljuk. A hosszú leolvasások későbbi összehangolásához a humán genomot (GRCh38) használjuk referenciaként.

Változathívás: A Megalodon szoftvert (Oxford Nanopore Technologies) a nyers jelből származó nukleotidszekvenciák meghatározására, a humán referenciagenom leolvasásainak összehangolására és a variánshívásra fogják használni. Az eredmények megbízhatóságát a Medaka (Oxford Nanopore Technologies) szoftvereszköz segítségével is megerősítik. Az eszköz neurális hálózati modellt használ a genetikai változatok azonosítására, összeállított konszenzusszekvenciák alapján. A változatadatok VCF-fájlokban lesznek tárolva.

A rövid tandem ismétlődések számszerűsítése és értékelése: A tandem-genotípusokat86 és STRique87-et fogják használni a tandem ismétlődések hosszában bekövetkezett változások kimutatására az egymáshoz igazított hosszú DNS-leolvasásokból. Az igazított olvasási bemeneten kívül a STRique szoftvereszköz elfogadja a nyers szekvenálási jelet, amely alapján egy rejtett Markov-modell számszerűsíti és kiértékeli a változás valószínűségét. A tandem ismétlések hosszának érvényesített változásait a rendszer TSV-fájlokban tárolja.

Metilációs helyek észlelése: A METEORE szoftvereszköz segítségével különböző metilációt hívó eszközöket fognak használni88. Az eredményekben talált metilált CpG szigetek megbízhatóságát a predikciós modellek (véletlenszerű erdő és többszörös lineáris regresszió) mutatják be. Ezenkívül az észlelt metilált helyeket összehasonlítják a Remora szoftver (Oxford Nanopore Technologies) eredményeivel. A megbízható metilációs helyek helyét BED és TSV fájlokban tároljuk.

2.4. "Az önkárosító magatartás befolyásolása és megelőzése a leginkább veszélyeztetett serdülők körében" című kutatás lefolytatása A részletes felmérési folyamatot a Vizsgálati Protokoll 2. ábrája és 2. táblázata írja le.

Az „Önkárosító magatartás befolyásolása és megelőzése a leginkább veszélyeztetett serdülők körében” című kutatás munkacsomagjainak részletes meghatározása.

2.4.1. WP 1: Működő kutatási modul létrehozása „Az önkárosító magatartás befolyásolása és megelőzése a leginkább veszélyeztetett serdülők körében”.

Vezető szervezet: Ljubljanai Egyetem Orvostudományi Kar és Mentálhigiénés Központ, Ljubljanai Egyetemi Pszichiátriai Klinika (UPKL) Résztvevő szervezetek: az UKC Ljubljanai Gyermekklinikájának Speciális Laboratóriumi Diagnosztikai Klinikai Intézete (KISLD) és Villamosmérnöki Kar , Számítástechnika és Informatika a Maribori Egyetemen (FERI) T1: Ebben a szakaszban minden kérdőívet készletben készítettünk a megfelelő felmérési számokkal.

1. Beiratkozási készlet (szűrő kérdőív, CSSRS, B-NSSI-AT)
2. Time1 kit (General Questionnaire1, PAI-A, TSCC, ECR-RS, DASA-YV, ASHRS, LPFSBF 2.0, LITE, BPFSC-11, ISAS), vénás vérminta gyűjtése genetikai elemzésekhez
3. Time2 kit (DASA-YV nyomkövetés, eseményjelentés (elkötelezett és megelőzött), általános kérdőív2)
4. Time3 kit (General Questionnaire3, CSSRS, B-NSSI-AT, PAI-A alskálák, TSCC alskálák, ECR-RS, DASA-YV, ASHRS, LPFSBF 2.0, LITE, BPFSC-11), vénás vérminta gyűjtése genetikai elemzésekhez.

T2: Tantárgyfelvételi és adatgyűjtési, tárolási és elemzési protokoll kidolgozása. Ez a munka magában foglalta az alanyoknak és a szülőknek/gondviselőknek szóló tájékoztató anyagok elkészítését, a tájékozott hozzájárulásokat/hozzájárulásokat, valamint egy részletes protokollt, amely a vizsgálat során a vizsgálók számára hozzáférhető lesz.

T3: Adatbeviteli és -tárolási rendszer előkészítése: Az adatbeviteli és tárolási információs rendszert úgy készítjük el, hogy az előre elkészített sablonokon keresztül lehetővé tegye az adatbevitelt a mérések kezdeti és közbenső jelentésére. A rendszer biztosítja az adatvédelmet, mivel a hozzáférés az anonimizált adatokra korlátozódik, és csak elemzési célokat szolgál (az (EU) 2016/679 általános adatvédelmi rendelettel (GDPR) összhangban). A rendszer biztosítja az adatok biztonságos törlését a projekt befejezése után (a GDPR szerint). Az információs rendszer fizikailag a Szlovén Köztársaságban lesz elhelyezve, és a hardverhez való fizikai hozzáférés csak a szakképzett személyzet által végzett adminisztratív tevékenységekre korlátozódik.

T4: A munkacsoport oktatása és képzése: Ez a rész több oktatási foglalkozásból áll a munkacsoport különböző tagjai számára: a. Betegbevonás, a kontrollcsoport tanulóinak, hallgatóinak bevonása (befogadási/kizárási kritériumok teljesítésének értékelése, a vizsgálattal kapcsolatos információk, serdülők és hozzátartozók hozzájárulása), b. Kérdőíves válaszok gyűjtése, c. Biológiai minták gyűjtése, d. Adatgyűjtés kórházi kezelés során, pl. Nyomon követés. A kezdeti edzéseket a tanulmányi folyamatok gyakoribb követése, a lehetséges szövődmények, a protokoll szükséges módosítása a kezdeti tapasztalatok szerint (Maja Drobnič Radobuljac projektvezető) és szükség esetén újraképzés követi.

2.4.2. WP 2: Vizsgálati és kontrollcsoportok toborzása, adatgyűjtés, betegek nyomon követése.

Vezető szervezet: UPKL Résztvevő szervezetek: KISLD és FERI

Célok:

Ebben a munkacsomagban a vizsgálók a betegek és az egészséges serdülők bevonására összpontosítanak. A munkacsomag magában foglalja az összes betegadat rögzítését az 1. időpontban, a betegek nyomon követését a kórházi kezelés során a hazabocsátásig (2. időpont), valamint az adatok visszagyűjtését a 3. időpontban (a vizsgálati protokoll 2. ábrája). A kontrollcsoport oldalán csak az 1. időpontban lévő adatokat rögzíti a rendszer (a vizsgálati protokoll 2. ábrája). Ennek a munkacsomagnak három fő célja van: kórházi és egészséges serdülők felvétele, adatgyűjtés és nyomon követés.

Feladatok:

T1: Kórházba került serdülők felvétele. A beiratkozási készletet és a Time1 készletet (lásd a vizsgálati protokoll 2. ábráját), a Time2 készletet pedig a kórházi kezelés során és a hazabocsátáskor kell beadni.

T2: Egészséges serdülők felvétele (kontrollcsoport). A beiratkozási készlet és az időkészlet1 kerül beadásra (lásd a vizsgálati protokoll 2. ábráját).

T3: Adatgyűjtés. A kórházi betegek adatait az Enrollment, Time1, Time2 készletek beadásával gyűjtik össze (lásd a vizsgálati protokoll 2. ábráját). A kontrollcsoportba tartozó serdülők a beiratkozáskor azonnal beadják az Enrollment és Time1 kiteket, ezektől a serdülőktől nem gyűjtenek más adatokat (lásd a vizsgálati protokoll 2. ábráját). Abban az esetben, ha a megkeresett serdülők közül bármelyik úgy tűnik, hogy segítségre szorul önkárosító magatartás vagy más nyilvánvaló mentális zavar miatt, megfelelő kezelésre utalják.

T4: Nyomon követés. Hat és 18 hónappal a kórházi kezelés befejezése után a vizsgálók ismét kapcsolatba lépnek a betegekkel, és beadják a Time3 kit-et (lásd a vizsgálati protokoll 2. ábráját). Ha úgy tűnik, hogy a megkeresett serdülők bármelyike ​​segítségre szorul önkárosító magatartás vagy más nyilvánvaló mentális zavar miatt, megfelelő kezelésre utalják.

2.4.3. WP 3: Kitermelt anyagok elemzése, adatbevitel és statisztikai elemzés Vezető szervezet: UPKL, KISLD és FERI Résztvevő szervezetek: UPKL, KISLD és FERI

Célok:

Az első cél a serdülők önkárosító magatartásának legveszélyesebb formáinak előfordulását befolyásoló tényezők azonosítása.

A második cél azoknak a tényezőknek a felmérése, amelyek befolyásolják a leginkább veszélyeztetett serdülők önkárosító magatartásának változását.

A harmadik cél egy eszköz (skála) kifejlesztése a serdülők önkárosulásának rövid és középtávú kockázatának gyors felmérésére (ASHRS).

A részletek a vizsgálati jegyzőkönyvben találhatók.