Comportamento autolesionistico tra gli adolescenti più a rischio (SH-MARA)

DESCRIZIONE DEL PROGETTO DI RICERCA "Influenze e prevenzione dei comportamenti autolesivi tra gli adolescenti più a rischio".

1. Background scientifico Dettagliato nel Protocollo di studio allegato
2. Descrizione dettagliata del programma di lavoro 2.1. Contenuti e programma di lavoro Lo studio includerà un campione di circa 200 giovani che saranno ricoverati per rischio di suicidio (i più a rischio in Slovenia) e un numero approssimativamente uguale di adolescenti sani. Al momento dell'arruolamento, i ricercatori valuteranno la presenza di diversi fattori esaminando dati demografici, diagnosi clinica, questionari di autovalutazione, valutazione sociale, test psicologici clinici, scale di valutazione e prelievo di sangue per analisi genetiche. Tracceranno longitudinalmente gli eventi autoaggressivi e gli eventi eteroaggressivi nei pazienti durante il ricovero e ne terranno traccia. I fattori di rischio e di protezione degli adolescenti più a rischio saranno confrontati con un gruppo di controllo di adolescenti sani. Gli stessi fattori negli adolescenti più a rischio saranno rivalutati dopo 6 e 18 mesi di trattamento. Una descrizione dettagliata del disegno dello studio è fornita nella Figura 2 e nella Tabella 2 del protocollo di studio.

2.2. Soggetti: i soggetti con criteri di inclusione ed esclusione sono descritti nella Tabella 2 (protocollo dello studio, WP2).

2.3. Metodi: 2.3.1. Questionari e strumenti psicodiagnostici:

1. Questionario di iscrizione, questionario generale1, questionario generale2, questionario generale3: i questionari riguarderanno dati generali e demografici, informazioni su trattamenti precedenti, farmaci ricevuti, disturbo mentale alla dimissione (ICD), situazioni psicosociali (ICD), malattie fisiche (ICD), COVID stato (vaccinato, guarito, testato), uso di sostanze psicoattive, storia di autolesionismo, tentativi di suicidio, rendimento scolastico, esperienza con i coetanei, orientamento e identità sessuale, residenza, composizione familiare, storia familiare di disturbi mentali, autolesionismo e tentativi di suicidio.
2. Scala di valutazione della gravità dei suicidi della Columbia (CSSRS)75.
3. Il breve strumento di valutazione dell'autolesionismo non suicidario (B-NSSI-AT)76.
4. Personality Assessment Inventory-Adolescent (PAI-A) (https://www.center-pds.si/Katalogtestov/Kliničnitesti/Vprašalnikzaocenoosebnosti-oblikazamladostnike-PAI-A.aspx).
5. Lista di controllo dei sintomi del trauma per i bambini (TSCC) (https://www.center-pds.si/Katalogtestov/Kliničnitesti/Vprašalnikotravmatiziranostiotrokinmladostnik. aspx).
6. Esperienze in Relazioni Strette-Strutture di Relazione (ECR-RS)77,78
7. Valutazione dinamica dell'aggressione situazionale - versione giovanile (DASA-YV)79.
8. Adolescent Self-Harm Risk Scale (ASHRS): questa è la scala che abbiamo sviluppato per il presente studio.
9. Il livello di funzionamento della personalità Scala-Breve modulo 2.0 (LPFSBF 2.0) 80.
10. Questionario Lifetime Incidence of Traumatic Events (LITE)81, 82.
11. Scala delle caratteristiche di personalità borderline (BPFSC-11)83.
12. Inventario delle dichiarazioni sull'autolesionismo (ISAS)84.

2.3.2. Metodi genetici: Isolamento del DNA: Il DNA genomico verrà isolato secondo il protocollo di laboratorio stabilito utilizzando il kit FlexGene DNA (Qiagen Germania) e 5 mL di campione di sangue EDTA. Il DNA isolato sarà conservato a 4°C.

Sequenziamento: il sequenziamento verrà eseguito sulla tecnologia di sequenziamento a lunga lettura interna disponibile nanopore PromethION (Oxford Nanopore Technologies). La capacità di rilevare le modifiche del DNA tramite differenze nell'intensità della corrente elettrica prodotta da una lettura di nanopori di una base non modificata e quella di una base modificata, consente il rilevamento della metilazione del DNA in diversi CpG dal DNA naturale umano a livello di epigenoma.

Le librerie saranno preparate utilizzando il kit di sequenziamento della legatura (SQK-LSK 109, Oxford Nanopore Technologies) nelle seguenti fasi: 1. NEBNext Ultra II End repair / dA-tailing, 2. legatura dei codici a barre nativi, 3. legatura degli adattatori di sequenziamento, 4 Priming della cella a flusso e caricamento della libreria di DNA (Flow Cell Priming Kit, Oxford Nanopore Technologies).

L'analisi sarà condotta utilizzando il DNA dei partecipanti con codice a barre, consentendo l'analisi simultanea di più partecipanti, riunendo la quantità equimolare di DNA in un unico pool, basato sui gruppi di osservazione. Il pooling dei campioni ridurrà l'effetto della variabilità dell'epigenoma individuale e arricchirà i segnali epigenetici specifici della coorte, potenzialmente associati al fenotipo clinico.

Identificazione delle basi bioinformatiche: dal segnale di sequenziamento grezzo, le sequenze nucleotidiche saranno determinate utilizzando lo strumento software Guppy85, che si basa su un modello di rete neurale predittiva. Le letture identificate e la loro affidabilità verranno archiviate in file FASTQ. Per i successivi allineamenti di letture lunghe, verrà utilizzato come riferimento il genoma umano (GRCh38).

Identificazione delle varianti: il software Megalodon (Oxford Nanopore Technologies) sarà utilizzato per determinare le sequenze nucleotidiche dal segnale grezzo, l'allineamento delle letture sul genoma di riferimento umano e l'identificazione delle varianti. L'affidabilità dei risultati sarà inoltre confermata utilizzando lo strumento software Medaka (Oxford Nanopore Technologies). Lo strumento utilizza un modello di rete neurale per identificare le varianti genetiche, sulla base di sequenze di consenso costruite. I dati delle varianti verranno archiviati in file VCF.

Quantificazione e valutazione di brevi ripetizioni in tandem: Tandem-genotypes86 e STRique87 saranno utilizzati per rilevare i cambiamenti nella lunghezza delle ripetizioni in tandem, da lunghe letture di DNA allineate. Oltre all'input di letture allineate, lo strumento software STRique accetta il segnale di sequenziamento grezzo, in base al quale un modello di Markov nascosto quantifica e valuta la probabilità di un cambiamento. Le modifiche convalidate nella lunghezza delle ripetizioni in tandem verranno memorizzate nei file TSV.

Rilevamento dei siti di metilazione: diversi strumenti di chiamata di metilazione saranno utilizzati utilizzando lo strumento software METEORE88. L'affidabilità delle isole CpG metilate trovate nei risultati sarà dimostrata dai modelli di previsione (foresta casuale e regressione lineare multipla). Inoltre, i siti metilati rilevati saranno confrontati con i risultati del software Remora (Oxford Nanopore Technologies). Le posizioni dei siti di metilazione affidabili saranno memorizzate nei file BED e TSV.

2.4. Svolgimento della ricerca "Influenze e prevenzione del comportamento autolesionista tra gli adolescenti più a rischio" Il processo di indagine dettagliato è descritto nella Figura 2 e nella Tabella 2 del Protocollo di studio.

Definizione di dettaglio dei pacchetti di lavoro della ricerca "Influenze e prevenzione del comportamento autolesionista tra gli adolescenti più a rischio".

2.4.1. WP 1: Istituzione di un modulo di ricerca funzionante su "Influenze e prevenzione del comportamento autolesionista tra gli adolescenti più a rischio".

Organizzazione capofila: Università di Lubiana, Facoltà di medicina e Centro per la salute mentale, Clinica psichiatrica universitaria di Lubiana (UPKL) Organizzazioni partecipanti: Istituto clinico di diagnostica di laboratorio speciale della Clinica pediatrica dell'UKC Lubiana (KISLD) e Facoltà di ingegneria elettrica , Informatica e Informatica dell'Università di Maribor (FERI) T1: In questa fase, tutti i questionari sono stati preparati in gruppi con i corrispondenti numeri del sondaggio.

1. Kit di iscrizione (questionario di screening, CSSRS, B-NSSI-AT)
2. Kit Time1 (General Questionnaire1, PAI-A, TSCC, ECR-RS, DASA-YV, ASHRS, LPFSBF 2.0, LITE, BPFSC-11, ISAS), prelievo di sangue venoso per analisi genetiche
3. Time2 kit (tracciamento DASA-YV, Incident Report (commited and prevented), General Questionnaire2)
4. Kit Time3 (General Questionnaire3, CSSRS, B-NSSI-AT, PAI-A subscales, TSCC subscales, ECR-RS, DASA-YV, ASHRS, LPFSBF 2.0, LITE, BPFSC-11), prelievo di sangue venoso per analisi genetiche.

I2: Sviluppo di un protocollo per l'arruolamento dei soggetti e l'acquisizione, l'archiviazione e l'analisi dei dati. Questo lavoro ha incluso la preparazione di materiali informativi per soggetti e genitori/tutori, consensi/consensi informati e un protocollo dettagliato che sarà accessibile agli investigatori durante lo studio.

T3: Preparazione del sistema di inserimento e archiviazione dei dati: il sistema informativo di inserimento e archiviazione dei dati sarà preparato in modo da consentire l'inserimento dei dati tramite modelli pre-preparati per la segnalazione iniziale e intermedia delle misurazioni. Il sistema garantirà la riservatezza dei dati, poiché l'accesso sarà limitato ai dati resi anonimi e consentito solo a fini di analisi (in linea con il Regolamento generale sulla protezione dei dati (UE) 2016/679 (GDPR)). Il sistema garantirà che i dati vengano cancellati in modo sicuro dopo il completamento del progetto (secondo il GDPR). Il sistema informativo sarà localizzato fisicamente nella Repubblica di Slovenia e l'accesso fisico all'hardware sarà limitato alle sole attività amministrative da parte di personale qualificato.

I4: Istruzione e formazione del gruppo di lavoro: questa parte consisterà in diverse sessioni educative per i diversi membri del gruppo di lavoro: a. Coinvolgimento dei pazienti, coinvolgimento degli alunni e degli studenti del gruppo di controllo (valutazione del rispetto dei criteri di inclusione/esclusione, informazioni sullo studio, ottenimento del consenso degli adolescenti e dei parenti), b. Raccolta delle risposte al questionario, c. Raccolta di campioni biologici, d. Raccolta dei dati durante il ricovero, ad es. Seguito. Le sessioni di formazione iniziale saranno seguite da un follow-up più frequente dei processi di studio, delle possibili complicazioni, dei necessari adattamenti del protocollo in base all'esperienza iniziale (responsabile del progetto Maja Drobnič Radobuljac) e della riqualificazione se necessario.

2.4.2. WP 2: Reclutamento di gruppi di studio e di controllo, raccolta dati, follow-up dei pazienti.

Organizzazione capofila: UPKL Organizzazioni partecipanti: KISLD e FERI

Obiettivi:

In questo pacchetto di lavoro gli investigatori si concentreranno sul coinvolgimento di pazienti e adolescenti sani. Il pacchetto di lavoro include l'acquisizione di tutti i dati del paziente al Tempo 1 e il monitoraggio dei pazienti durante il ricovero fino alla dimissione (Tempo 2) e la riconquista dei dati al Tempo 3 (Figura 2 del protocollo di studio). Sul lato del gruppo di controllo, verranno acquisiti solo i dati al Tempo 1 (Figura 2 del protocollo di studio). Questo pacchetto di lavoro ha tre obiettivi principali: arruolamento di adolescenti ospedalizzati e sani, raccolta dati e follow-up.

Compiti:

T1: Iscrizione di adolescenti ricoverati. Verranno somministrati l'Enrollment Kit e il Time1 Kit (vedere la Figura 2 del protocollo di studio) e il Time2 Kit durante il ricovero e alla dimissione.

T2: Iscrizione di adolescenti sani (gruppo di controllo). Verranno somministrati l'Enrollment Kit e il Time Kit1 (vedere la Figura 2 del Protocollo di studio).

T3: Raccolta dati. I dati dei pazienti ospedalizzati saranno raccolti somministrando i kit Enrollment, Time1, Time2 (vedi Figura 2 del protocollo di studio). Agli adolescenti nel gruppo di controllo verranno somministrati immediatamente i kit Enrollment e Time1 al momento dell'arruolamento, nessun altro dato verrà raccolto da questi adolescenti (vedere la Figura 2 del protocollo di studio). Nel caso in cui uno qualsiasi degli adolescenti avvicinati sembri aver bisogno di aiuto per comportamento autolesionistico o altri disturbi mentali palesi, sarà indirizzato a un trattamento appropriato.

T4: Inseguimento. Sei e 18 mesi dopo la fine del ricovero, gli investigatori contatteranno nuovamente i pazienti e somministreranno il kit Time3 (vedere la Figura 2 del protocollo di studio). Se qualcuno degli adolescenti avvicinati sembra aver bisogno di aiuto per comportamento autolesionistico o altri disturbi mentali palesi, verrà indirizzato per un trattamento appropriato.

2.4.3. WP 3: Analisi dei materiali estratti, data entry e analisi statistica Organizzazione capofila: UPKL, KISLD e FERI Organizzazioni partecipanti: UPKL, KISLD e FERI

Obiettivi:

Il primo obiettivo è identificare i fattori che influenzano l'insorgenza delle forme più minacciose di comportamento autolesivo negli adolescenti.

Il secondo obiettivo è valutare i fattori che influenzano il cambiamento nel rischio di comportamenti autolesivi negli adolescenti più a rischio.

Il terzo obiettivo è sviluppare uno strumento (scala) per la valutazione rapida del rischio a breve e medio termine di autolesionismo negli adolescenti (ASHRS).

I dettagli sono nel protocollo di studio.