Comportamento de automutilação entre os adolescentes em maior risco (SH-MARA)

DESCRIÇÃO DO PROJETO DE INVESTIGAÇÃO "Influências e prevenção de comportamentos autolesivos entre os adolescentes de maior risco".

1. Formação científica Detalhada no Protocolo de Estudo em anexo
2. Descrição detalhada do programa de trabalho 2.1. Conteúdo e programa de trabalho O estudo incluirá uma amostra de aproximadamente 200 jovens que serão hospitalizados por risco de suicídio (o maior risco na Eslovênia) e um número aproximadamente igual de adolescentes saudáveis. Na inscrição, os investigadores avaliarão a presença de vários fatores, revisando dados demográficos, diagnóstico clínico, questionários de autoavaliação, avaliação social, testes psicológicos clínicos, escalas de classificação e amostragem de sangue para análises genéticas. Eles rastrearão longitudinalmente eventos autoagressivos e eventos heteroagressivos nos pacientes durante a hospitalização e manterão um registro contínuo deles. Os fatores de risco e proteção dos adolescentes de maior risco serão comparados a um grupo controle de adolescentes saudáveis. Os mesmos fatores nos adolescentes de maior risco serão reavaliados após 6 e 18 meses de tratamento. Uma descrição detalhada do desenho do estudo é dada na Figura 2 e na Tabela 2 do Protocolo do Estudo.

2.2. Indivíduos: Os indivíduos com critérios de inclusão e exclusão são descritos na Tabela 2 (Protocolo do estudo, WP2).

2.3. Métodos: 2.3.1. Questionários e ferramentas de psicodiagnóstico:

1. Questionário de inscrição, Questionário geral1, Questionário geral2, Questionário geral3: Os questionários cobrirão dados gerais e demográficos, informações sobre tratamentos anteriores, medicação recebida, transtorno mental na alta (CID), situações psicossociais (CID), doenças físicas (CID), COVID estado (vacinado, recuperado, testado), uso de substâncias psicoativas, história de autoagressão, tentativas de suicídio, desempenho escolar, experiência com pares, orientação e identidade sexual, residência, composição familiar, história familiar de transtornos mentais, autoagressão e tentativas de suicídio.
2. Escala de Classificação de Gravidade do Suicídio de Columbia (CSSRS)75.
3. A Ferramenta Breve de Avaliação de Automutilação Não Suicida (B-NSSI-AT)76.
4. Inventário de Avaliação de Personalidade-Adolescentes (PAI-A) (https://www.center-pds.si/Katalogtestov/Kliničnitesti/Vprašalnikzaocenoosebnosti-oblikazamladostnike-PAI-A.aspx).
5. Lista de verificação de sintomas de trauma para crianças (TSCC) (https://www.center-pds.si/Katalogtestov/Kliničnitesti/Vprašalnikotravmatiziranostiotrokinmladostnik. aspx).
6. Experiências em Relações Próximas-Estruturas de Relacionamento (ECR-RS)77,78
7. Avaliação Dinâmica da Agressão Situacional-Versão Juvenil (DASA-YV)79.
8. Escala de risco de autoagressão para adolescentes (ASHRS): é a escala que desenvolvemos para o presente estudo.
9. Escala Resumida de Nível de Funcionamento da Personalidade 2.0 (LPFSBF 2.0) 80.
10. Questionário de incidência de eventos traumáticos ao longo da vida (LITE) 81, 82.
11. Escala de características de personalidade limítrofe (BPFSC-11)83.
12. Inventário de Afirmações Sobre Automutilação (ISAS)84.

2.3.2. Métodos genéticos: Isolamento de DNA: O DNA genômico será isolado de acordo com o protocolo laboratorial estabelecido usando o kit FlexGene DNA (Qiagen Germany) e 5 mL de amostra de sangue com EDTA. O DNA isolado será armazenado a 4°C.

Sequenciamento: O sequenciamento será realizado na tecnologia de sequenciamento de leitura longa disponível internamente PromethION (Oxford Nanopore Technologies). A capacidade de detectar modificações no DNA por meio de diferenças na intensidade da corrente elétrica produzida a partir de uma leitura de nanoporos de uma base não modificada e de uma base modificada permite a detecção da metilação do DNA em diferentes CpGs do DNA natural humano no nível do epigenoma.

As bibliotecas serão preparadas usando kit de sequenciamento de ligação (SQK-LSK 109, Oxford Nanopore Technologies) nas seguintes etapas: 1. NEBNext Ultra II End repair / dA-tailing, 2. ligação dos códigos de barras nativos, 3. ligação dos adaptadores de sequenciamento, 4 . iniciação da célula de fluxo e carregamento da biblioteca de DNA (Kit de iniciação da célula de fluxo, Oxford Nanopore Technologies).

A análise será realizada usando o DNA dos participantes com código de barras, permitindo a análise simultânea de vários participantes, agrupando a quantidade equimolar de DNA em um único pool, com base nos grupos de observação. O agrupamento de amostras reduzirá o efeito da variabilidade do epigenoma individual e enriquecerá os sinais epigenéticos específicos da coorte, potencialmente associados ao fenótipo clínico.

Chamada de base de bioinformática: A partir do sinal de sequenciamento bruto, as sequências de nucleotídeos serão determinadas usando a ferramenta de software Guppy85, que é baseada em um modelo de rede neural preditiva. As leituras identificadas e sua confiabilidade serão armazenadas em arquivos FASTQ. Para alinhamentos subsequentes de leituras longas, o genoma humano (GRCh38) será usado como referência.

Variant Calling: O software Megalodon (Oxford Nanopore Technologies) será utilizado para determinar sequências de nucleotídeos do sinal bruto, alinhamento de leituras no genoma humano de referência e chamada de variantes. A confiabilidade das descobertas será adicionalmente confirmada usando a ferramenta de software Medaka (Oxford Nanopore Technologies). A ferramenta usa um modelo de rede neural para identificar variantes genéticas, com base em sequências de consenso construídas. Os dados da variante serão armazenados em arquivos VCF.

Quantificação e avaliação de repetições curtas em tandem: Os genótipos Tandem86 e STRique87 serão usados ​​para detectar alterações no comprimento de repetições tandem, a partir de leituras longas alinhadas de DNA. Além da entrada de leituras alinhadas, a ferramenta de software STRique aceita o sinal de sequenciamento bruto, com base no qual um modelo oculto de Markov quantifica e avalia a probabilidade de uma mudança. As alterações validadas no comprimento das repetições em tandem serão armazenadas em arquivos TSV.

Detecção de locais de metilação: Diferentes ferramentas de chamada de metilação serão utilizadas usando a ferramenta de software METEORE88. A confiabilidade das ilhas CpG metiladas encontradas nos resultados será demonstrada pelos modelos de predição (floresta aleatória e regressão linear múltipla). Adicionalmente, os sítios metilados detectados serão comparados com os resultados do software Remora (Oxford Nanopore Technologies). Os locais de sites de metilação confiáveis ​​serão armazenados em arquivos BED e TSV.

2.4. Condução da pesquisa "Influências e prevenção do comportamento de autoagressão entre os adolescentes de maior risco" O processo de pesquisa detalhado é descrito na Figura 2 e na Tabela 2 do Protocolo do Estudo.

Definição detalhada dos pacotes de trabalho da pesquisa "Influências e prevenção de comportamentos autolesivos entre os adolescentes de maior risco".

2.4.1. WP 1: Estabelecimento de um módulo de pesquisa de trabalho sobre "Influências e prevenção do comportamento de autoagressão entre os adolescentes em maior risco".

Organização responsável: Universidade de Ljubljana, Faculdade de Medicina e Centro de Saúde Mental, Clínica Psiquiátrica Universitária Ljubljana (UPKL) Organizações participantes: Instituto Clínico de Diagnósticos Laboratoriais Especiais da Clínica Pediátrica do UKC Ljubljana (KISLD) e a Faculdade de Engenharia Elétrica , Ciência da Computação e Informática da Universidade de Maribor (FERI) T1: Nesta fase, todos os questionários foram preparados em conjuntos com os números de pesquisa correspondentes.

1. Kit de inscrição (questionário de triagem, CSSRS, B-NSSI-AT)
2. Kit Time1 (Questionário Geral1, PAI-A, TSCC, ECR-RS, DASA-YV, ASHRS, LPFSBF 2.0, LITE, BPFSC-11, ISAS), coleta de amostra de sangue venoso para análises genéticas
3. Kit Time2 (rastreamento DASA-YV, Relatório de Incidente (comprometido e evitado), Questionário Geral2)
4. Kit Time3 (General Questionnaire3, CSSRS, subescalas B-NSSI-AT, PAI-A, subescalas TSCC, ECR-RS, DASA-YV, ASHRS, LPFSBF 2.0, LITE, BPFSC-11), coleta de amostra de sangue venoso para análises genéticas.

T2: Desenvolvimento de um protocolo para inscrição de sujeitos e aquisição, armazenamento e análise de dados. Este trabalho incluiu a preparação de materiais informativos para os sujeitos e pais/responsáveis, consentimentos informados/assentimentos e um protocolo detalhado que estará acessível aos investigadores ao longo do estudo.

T3: Preparação do sistema de entrada e armazenamento de dados: O sistema de informações de entrada e armazenamento de dados será preparado para permitir a entrada de dados por meio de modelos pré-preparados para relatórios iniciais e intermediários de medições. O sistema garantirá a privacidade dos dados, uma vez que o acesso será restrito a dados anonimizados e permitido apenas para efeitos de análise (em linha com o Regulamento Geral de Proteção de Dados (UE) 2016/679 (RGPD)). O sistema garantirá que os dados sejam excluídos com segurança após a conclusão do projeto (de acordo com o GDPR). O sistema de informação estará localizado fisicamente na República da Eslovênia, e o acesso físico ao hardware será limitado apenas a atividades administrativas por pessoal qualificado.

T4: Educação e formação do grupo de trabalho: Esta parte consistirá em várias sessões educativas para os diferentes membros do grupo de trabalho: a. Envolvimento do paciente, envolvimento dos alunos e alunos do grupo controle (avaliação do cumprimento dos critérios de inclusão/exclusão, informações sobre o estudo, obtenção do consentimento dos adolescentes e familiares), b. Coleta de respostas do questionário, c. Coleta de amostras biológicas, d. Recolha de dados durante o internamento, e. Seguir. As sessões de treinamento inicial serão seguidas por um acompanhamento mais frequente dos processos do estudo, possíveis complicações, ajustes necessários do protocolo de acordo com a experiência inicial (gerente de projeto Maja Drobnič Radobuljac) e retreinamento, se necessário.

2.4.2. WP 2: Recrutamento de grupo de estudo e controle, coleta de dados, acompanhamento do paciente.

Organização líder: UPKL Organizações participantes: KISLD e FERI

Objetivos.

Neste pacote de trabalho, os investigadores se concentrarão no envolvimento de pacientes e adolescentes saudáveis. O pacote de trabalho inclui capturar todos os dados do paciente no Tempo 1 e acompanhar os pacientes durante a hospitalização até a alta (Tempo 2) e recapturar os dados no Tempo 3 (Figura 2 do Protocolo do Estudo). Do lado do grupo de controle, apenas os dados do Tempo 1 serão capturados (Figura 2 do Protocolo do Estudo). Este pacote de trabalho tem três objetivos principais: inclusão de adolescentes hospitalizados e saudáveis, coleta de dados e acompanhamento.

Tarefas:

T1: Inscrição de adolescentes hospitalizados. O Kit de inscrição e o Kit Time1 serão administrados (consulte a Figura 2 do Protocolo do estudo) e o Kit Time2 será administrado durante a hospitalização e na alta.

T2: Inscrição de adolescentes saudáveis ​​(grupo controle). O Kit de inscrição e o Kit de tempo1 serão administrados (consulte a Figura 2 do Protocolo do estudo).

T3: Coleta de dados. Os dados dos pacientes hospitalizados serão coletados por meio da administração dos kits Enrollment, Time1, Time2 (ver Figura 2 do Protocolo do Estudo). Os adolescentes do grupo de controle terão os kits Enrollment e Time1 administrados imediatamente após a inscrição, nenhum outro dado será coletado desses adolescentes (consulte a Figura 2 do Protocolo do estudo). No caso de algum dos adolescentes abordados parecer necessitar de ajuda por comportamento autolesivo ou outros transtornos mentais evidentes, eles serão encaminhados para tratamento adequado.

T4: Acompanhamento. Seis e 18 meses após o término da internação, os investigadores entrarão em contato com os pacientes novamente e administrarão o kit Time3 (ver Figura 2 do Protocolo do Estudo). Se algum dos adolescentes abordados parecer precisar de ajuda para comportamento autolesivo ou outros transtornos mentais evidentes, eles serão encaminhados para tratamento adequado.

2.4.3. WP 3: Análise de materiais extraídos, entrada de dados e análise estatística Organização líder: UPKL, KISLD e FERI Organizações participantes: UPKL, KISLD e FERI

Objetivos.

O primeiro objetivo é identificar os fatores que influenciam a ocorrência das formas mais ameaçadoras de comportamento autolesivo em adolescentes.

O segundo objetivo é avaliar os fatores que influenciam a mudança no comportamento de risco de autoagressão nos adolescentes em maior risco.

O terceiro objetivo é desenvolver um instrumento (escala) para avaliação rápida do risco de autoagressão de curto e médio prazo em adolescentes (ASHRS).

Os detalhes estão no Protocolo do Estudo.