Tuoreiden alkionsiirtojen (ET) korvaaminen jäädytetyillä alkioiden siirroilla (FET), joissa käytetään lasitusta

Kaikkia alkuperäisen kohortin potilaita hoidettiin pitkällä munasarjojen stimulaatioprotokollalla. Aivolisäkkeen alasäätelyä varten potilaita hoidettiin päivittäisellä 0,5 mg:lla busereliinia (suprefact, Aventis, Frankfurt, Saksa) kuukautiskierron päivästä 21 alkaen. Busereliinia vähennettiin 0,25 mg:aan päivässä, kun munasarjat olivat lepotilassa ultraäänitutkimuksessa, ja COH aloitettiin rekombinantilla FSH:lla (Gonal F, Serono, Aubnne, Sveitsi) 150 IU/vrk vieroitusverenvuotopäivänä 2. Sarja ultraäänitutkimuksia ja seerumin E2-tasojen arviointia käytettiin munasarjojen vasteen arvioimiseen, minkä jälkeen gonadotropiiniannosta säädettiin tarpeen mukaan. Ihmisen koriongonadotropiinia (pregnyl, Organon, Oss, Alankomaat) annettiin 10 000 IU, kun vähintään kahden follikkelin keskimääräinen halkaisija oli 18 mm.

Munasolujen talteenotto suoritettiin 34-36 tuntia hCG:n annon jälkeen ja tavanomainen keinosiemennys tai ICSI suoritettiin kliinisesti tarkoituksenmukaisesti.

187 potilaalle, jotka oli jaettu tuoreeseen ET-ryhmään, ET suoritettiin päivänä 2. Alkiot siirrettiin ultraääniohjauksessa C.C.D. alkionsiirtokatetri (Laboratory C.C.D., Pariisi, Ranska). Luteaalin tuki progesteronilla öljyssä (Progesterone, Aburaihan Co., Teheran, Iran) 100 mg päivittäinen IM aloitettiin munasolujen talteenottopäivänä ja sitä jatkettiin, kunnes sikiön sydämen toiminta on dokumentoitu ultraäänellä.

FET-ryhmään jaetuilla 187 potilaalla kaikkien alkioiden kylmäsäilytys suoritettiin lasituksella Cryotop-menetelmällä ja kahden kuukauden kuluttua alkiot siirrettiin.

Alkioiden kryotop-lasittamisen protokolla on kuvattu aiemmin (Kuwayama et al., 2005; Kuwayama, 2007).

Kaksivaiheisen lataamisen jälkeen tasapainotusliuoksella, joka sisältää 7,5 % (v/v) etyleeniglykolia ja 7,5 % (v/v) dimetyylisulfoksidia, ja lasitusliuoksella, joka sisältää 15 % (v/v) etyleeniglykolia, 15 % (v/v) ) dimetyylisulfoksidia ja 0,5 mol/l sakkaroosia, alkiot ladattiin kapealla lasikapillaarilla Cryotopiin tilavuudessa < 0,1 ui. Lataamisen jälkeen lähes kaikki liuos poistettiin, jotta alkioita peitti vain ohut kerros, ja näyte upotettiin nopeasti nestemäiseen typpeen (LN). Tämän jälkeen muovikorkki vedettiin Cryotopin kalvoosan päälle ja näyte säilytettiin LN:n alla. Lämmityksen aikana suojakorkki poistettiin Cryotopista sen ollessa vielä upotettuna LN:iin ja Cryotop upotettiin suoraan sakkaroosia sisältävään 37 ˚C väliaineeseen. Sitten alkioita inkuboitiin peräkkäin laimennusaineliuoksessa ennen uutta in vitro -viljelyä siirtoa varten.

Potilaat valmisteltiin ET:hen oraalisella E2:lla, jotta endometriumin paksuus oli ≥ 8 mm ja kolminkertainen viivakuvio ultraäänikuvauksissa. Tuolloin potilaille annettiin 100 mg IM progesteronia öljyssä päivittäin ja ET tehtiin kolme päivää myöhemmin vatsan ultraääniohjauksessa aiemmin kuvatulla tavalla. Oraalista E2:ta ja progesteronia jatkettiin, kunnes sikiön sydämen toiminta dokumentoitiin ultraäänitutkimuksella.