Udskiftning af friske embryooverførsler (ET'er) med frosne embryooverførsler (FET'er) ved hjælp af forglasning

Alle patienter i den indledende kohorte blev behandlet med lang protokol for ovariestimulering. Til hypofyse-nedregulering blev patienter behandlet med daglig administration af 0,5 mg buserelin (suprefact, Aventis, Frankfurt, Tyskland) fra dag 21 i menstruationscyklussen. Buserelin blev reduceret til 0,25 mg dagligt, når æggestokkene var stille på ultralyd, og COH blev påbegyndt med rekombinant FSH (Gonal F, Serono, Aubnne, Schweiz) 150 IE/dag på dag 2 af seponeringsblødning. Serielle ultralydsundersøgelser og evaluering af serum E2-niveauer blev brugt til at vurdere ovarierespons, og derefter blev gonadotropindosisjusteringer foretaget efter behov. Humant choriongonadotropin (pregnyl, Organon, Oss, Holland) 10.000 IE blev administreret, når mindst to follikler nåede en gennemsnitlig diameter på 18 mm.

Oocytudvinding blev udført 34-36 timer efter hCG-administration, og konventionel insemination eller ICSI blev udført som klinisk passende.

Hos 187 patienter allokeret til frisk ET-gruppe blev ET udført på dag 2. Embryoer blev overført under ultralydsvejledning med en C.C.D. embryooverførselskateter (Laboratory C.C.D., Paris, Frankrig). Luteal støtte med progesteron i olie (Progesterone, Aburaihan Co., Teheran, Iran) 100 mg dagligt IM blev påbegyndt på dagen for oocytudhentning og fortsatte indtil dokumentationen af ​​fosterets hjerteaktivitet på ultralyd.

Hos 187 patienter allokeret til FET-gruppen blev der foretaget kryokonservering af alle embryoner med forglasning ved Cryotop-metoden, og efter to måneder blev embryoner overført.

Protokollen for Cryotop-vitrifikation af embryoner blev beskrevet tidligere (Kuwayama et al., 2005; Kuwayama, 2007).

Efter en to-trins fyldning med ækvilibreringsopløsning indeholdende 7,5% (v/v) ethylenglycol og 7,5% (v/v) dimethylsulfoxid og forglasningsopløsning indeholdende 15% (v/v) ethylenglycol, 15% (v/v) ) dimethylsulfoxid og 0,5 mol/L saccharose, embryoner blev fyldt med en smal glaskapillar på Cryotop i et volumen på < 0,1 µL. Efter påfyldning blev næsten al opløsningen fjernet for kun at efterlade et tyndt lag, der dækkede embryoerne, og prøven blev hurtigt nedsænket i flydende nitrogen (LN). Efterfølgende blev plastikhætten trukket over filmdelen af ​​Cryotop, og prøven blev opbevaret under LN. Ved opvarmning blev beskyttelseshætten fjernet fra Cryotop, mens den stadig var nedsænket i LN, og Cryotop blev nedsænket direkte i et 37˚C medium indeholdende saccharose. Embryonerne blev derefter sekventielt inkuberet i opløsning af fortyndingsmidler før yderligere in vitro-dyrkning til overførsel.

Patienterne blev forberedt til ET med oral E2 for at opnå endometrietykkelse ≥ 8 mm og tredobbelt linjemønster på ultralydsscanninger. På det tidspunkt fik patienterne 100 mg IM progesteron i olie dagligt, og ET blev præformet tre dage senere under abdominal ultralydsvejledning som beskrevet tidligere. Oral E2 og progesteron blev fortsat indtil dokumentation af fosterets hjerteaktivitet ved ultralyd.