Ersatz frischer Embryonentransfers (ETs) durch gefrorene Embryonentransfers (FETs) mittels Vitrifikation

Alle Patientinnen der ersten Kohorte wurden mit einem langen Protokoll zur Stimulation der Eierstöcke behandelt. Zur Herunterregulierung der Hypophyse wurden die Patienten ab dem 21. Tag des Menstruationszyklus mit täglicher Gabe von 0,5 mg Buserelin (Suprefact, Aventis, Frankfurt, Deutschland) behandelt. Buserelin wurde auf 0,25 mg täglich reduziert, wenn die Eierstöcke im Ultraschall ruhig waren, und COH wurde mit rekombinantem FSH (Gonal F, Serono, Aubnne, Schweiz) 150 IE/Tag am Tag 2 der Entzugsblutung eingeleitet. Zur Beurteilung der Reaktion der Eierstöcke wurden serielle Ultraschalluntersuchungen und die Bestimmung der Serum-E2-Spiegel durchgeführt. Anschließend wurden bei Bedarf Anpassungen der Gonadotropindosis vorgenommen. 10.000 IE menschliches Choriongonadotropin (Pregnyl, Organon, Oss, Niederlande) wurden verabreicht, wenn mindestens zwei Follikel einen mittleren Durchmesser von 18 mm erreichten.

Die Eizellentnahme erfolgte 34–36 Stunden nach der hCG-Verabreichung und je nach klinischer Notwendigkeit wurde eine konventionelle Insemination oder ICSI durchgeführt.

Bei 187 Patienten, die der frischen ET-Gruppe zugeordnet wurden, wurde die ET am zweiten Tag durchgeführt. Die Embryonen wurden unter Ultraschallkontrolle mit einem C.C.D. übertragen. Embryotransferkatheter (Labor C.C.D., Paris, Frankreich). Die Lutealunterstützung mit Progesteron in Öl (Progesterone, Aburaihan Co., Teheran, Iran) 100 mg täglich IM wurde am Tag der Eizellentnahme begonnen und bis zur Dokumentation der fetalen Herzaktivität im Ultraschall fortgesetzt.

Bei 187 Patienten der FET-Gruppe wurde eine Kryokonservierung aller Embryonen mit Vitrifizierung mittels der Cryotop-Methode durchgeführt und nach zwei Monaten wurden die Embryonen übertragen.

Das Protokoll für die Cryotop-Vitrifizierung von Embryonen wurde bereits beschrieben (Kuwayama et al., 2005; Kuwayama, 2007).

Nach einer zweistufigen Beladung mit einer Äquilibrierungslösung, die 7,5 % (v/v) Ethylenglykol und 7,5 % (v/v) Dimethylsulfoxid enthält, und einer Vitrifikationslösung, die 15 % (v/v) Ethylenglykol enthält, werden 15 % (v/v) ) Dimethylsulfoxid und 0,5 mol/L Saccharose wurden Embryonen mit einer schmalen Glaskapillare in einem Volumen von < 0,1 µL auf das Cryotop geladen. Nach dem Beladen wurde fast die gesamte Lösung entfernt, so dass nur noch eine dünne Schicht auf den Embryonen zurückblieb, und die Probe wurde schnell in flüssigen Stickstoff (LN) getaucht. Anschließend wurde die Plastikkappe über den Folienteil des Cryotop gezogen und die Probe unter LN gelagert. Beim Erwärmen wurde die Schutzkappe vom Cryotop entfernt, während es noch in LN eingetaucht war, und das Cryotop wurde direkt in ein 37 °C warmes Medium mit Saccharose eingetaucht. Die Embryonen wurden dann nacheinander in Verdünnungslösungen inkubiert, bevor sie zum Transfer in vitro weiterkultiviert wurden.

Die Patienten wurden mit oralem E2 auf die ET vorbereitet, um eine Endometriumdicke von ≥ 8 mm und ein Dreifachlinienmuster bei Ultraschalluntersuchungen zu erreichen. Zu diesem Zeitpunkt erhielten die Patienten täglich 100 mg IM-Progesteron in Öl und drei Tage später wurde wie zuvor beschrieben eine ET unter Ultraschallkontrolle des Abdomens durchgeführt. Orales E2 und Progesteron wurden fortgesetzt, bis die fetale Herzaktivität mittels Ultraschall dokumentiert wurde.