Erstatning av ferske embryooverføringer (ET-er) med frosne embryooverføringer (FET-er) ved bruk av forglasning

Alle pasienter i den første kohorten ble behandlet med lang protokoll for eggstokkstimulering. For nedregulering av hypofysen ble pasienter behandlet med daglig administrering av 0,5 mg buserelin (overtrykk, Aventis, Frankfurt, Tyskland) fra dag 21 av menstruasjonssyklusen. Buserelin ble redusert til 0,25 mg daglig når eggstokkene var i ro på ultralyd, og COH ble initiert med rekombinant FSH (Gonal F, Serono, Aubnne, Sveits) 150 IE/dag på dag 2 av seponeringsblødning. Serielle ultralydundersøkelser og evaluering av serum E2-nivåer ble brukt for å vurdere ovarierespons, og deretter ble gonadotropindosejusteringer gjort etter behov. Humant koriongonadotropin (pregnyl, Organon, Oss, Nederland) 10 000 IE ble administrert når minst to follikler nådde en gjennomsnittlig diameter på 18 mm.

Oocyttuthenting ble utført 34-36 timer etter hCG-administrering og konvensjonell inseminasjon eller ICSI ble utført etter klinisk hensikt.

Hos 187 pasienter allokert til fersk ET-gruppe ble ET utført på dag 2. Embryoer ble overført under ultralydveiledning, med en C.C.D. embryooverføringskateter (Laboratory C.C.D., Paris, Frankrike). Luteal støtte med progesteron i olje (Progesterone, Aburaihan Co., Teheran, Iran) 100 mg daglig IM ble startet på dagen for oocyttuthenting og fortsatte inntil dokumentasjon av fosterets hjerteaktivitet på ultralyd.

Hos 187 pasienter allokert til FET-gruppen ble kryokonservering av alle embryoer utført med forglasning ved Cryotop-metoden, og etter to måneder ble embryoene overført.

Protokollen for Cryotop-vitrifisering av embryoer ble beskrevet tidligere (Kuwayama et al., 2005; Kuwayama, 2007).

Etter en to-trinns lasting med ekvilibreringsløsning som inneholder 7,5 % (v/v) etylenglykol og 7,5 % (v/v) dimetylsulfoksid, og forglasningsløsning som inneholder 15 % (v/v) etylenglykol, 15 % (v/v) ) dimetylsulfoksid og 0,5 mol/L sukrose, ble embryoer lastet med en smal glasskapillær på kryotoppen i et volum på < 0,1 µL. Etter lasting ble nesten all løsningen fjernet for å etterlate et tynt lag som dekket embryoene, og prøven ble raskt nedsenket i flytende nitrogen (LN). Deretter ble plasthetten trukket over filmdelen av Cryotop, og prøven ble lagret under LN. Ved oppvarming ble beskyttelseshetten fjernet fra Cryotop mens den fortsatt var nedsenket i LN og Cryotop ble nedsenket direkte i et 37˚C medium som inneholdt sukrose. Embryoene ble deretter sekvensielt inkubert i fortynningsløsning før videre in vitro-kultur for overføring.

Pasientene ble forberedt på ET med oral E2 for å oppnå endometrietykkelse ≥ 8 mm og trippellinjemønster på ultralydsskanninger. På det tidspunktet ble pasientene gitt 100 mg IM progesteron i olje daglig, og ET ble utført tre dager senere under abdominal ultralydveiledning som beskrevet tidligere. Oral E2 og progesteron ble fortsatt inntil dokumentasjon av fosterets hjerteaktivitet ved ultralyd.