Sostituzione di trasferimenti di embrioni freschi (ET) con trasferimenti di embrioni congelati (FET) mediante vetrificazione

Tutti i pazienti nella coorte iniziale sono stati trattati con protocollo lungo per la stimolazione ovarica. Per la down-regolazione ipofisaria, le pazienti sono state trattate con la somministrazione giornaliera di 0,5 mg di buserelina (suprefact, Aventis, Francoforte, Germania) dal giorno 21 del ciclo mestruale. Il buserelin è stato ridotto a 0,25 mg al giorno quando le ovaie erano quiescenti all'ecografia e la COH è stata iniziata con FSH ricombinante (Gonal F, Serono, Aubnne, Svizzera) 150 UI/giorno il giorno 2 dell'emorragia da sospensione. Sono stati utilizzati esami ecografici seriali e la valutazione dei livelli sierici di E2 per valutare la risposta ovarica, quindi sono stati effettuati gli aggiustamenti della dose di gonadotropina secondo necessità. Gonadotropina corionica umana (pregnyl, Organon, Oss, Paesi Bassi) 10.000 UI sono state somministrate quando almeno due follicoli hanno raggiunto un diametro medio di 18 mm.

Il recupero degli ovociti è stato eseguito 34-36 ore dopo la somministrazione di hCG e l'inseminazione convenzionale o ICSI è stata eseguita come clinicamente appropriato.

In 187 pazienti assegnati al gruppo ET fresco, ET è stato eseguito il giorno 2. Gli embrioni sono stati trasferiti sotto guida ecografica, con un C.C.D. catetere per il trasferimento di embrioni (Laboratorio C.C.D., Parigi, Francia). Il supporto luteale con progesterone in olio (Progesterone, Aburaihan Co., Teheran, Iran) 100 mg al giorno IM è stato iniziato il giorno del prelievo degli ovociti e continuato fino alla documentazione dell'attività cardiaca fetale sugli ultrasuoni.

In 187 pazienti assegnate al gruppo FET, è stata intrapresa la crioconservazione di tutti gli embrioni con vetrificazione mediante metodo Cryotop e dopo due mesi gli embrioni sono stati trasferiti.

Il protocollo per la vetrificazione Cryotop degli embrioni è stato descritto in precedenza (Kuwayama et al., 2005; Kuwayama, 2007).

Dopo un caricamento in due fasi con una soluzione di equilibratura contenente il 7,5% (v/v) di glicole etilenico e il 7,5% (v/v) dimetilsolfossido e una soluzione di vetrificazione contenente il 15% (v/v) di glicole etilenico, il 15% (v/v) ) dimetilsolfossido e 0,5 mol/L di saccarosio, gli embrioni sono stati caricati con uno stretto capillare di vetro sul Cryotop in un volume < 0,1 µL . Dopo il caricamento, quasi tutta la soluzione è stata rimossa per lasciare solo uno strato sottile che copriva gli embrioni e il campione è stato rapidamente immerso in azoto liquido (LN). Successivamente, il cappuccio di plastica è stato applicato sulla parte in pellicola del Cryotop e il campione è stato conservato sotto LN. Al riscaldamento, il cappuccio protettivo è stato rimosso dal Cryotop mentre era ancora immerso in LN e il Cryotop è stato immerso direttamente in un terreno a 37°C contenente saccarosio. Gli embrioni sono stati poi sequenzialmente incubati in soluzione diluente prima di un'ulteriore coltura in vitro per il trasferimento.

I pazienti sono stati preparati per ET con E2 orale per raggiungere uno spessore endometriale ≥ 8 mm e un pattern a tripla linea sulle scansioni ecografiche. A quel tempo, ai pazienti venivano somministrati 100 mg di progesterone IM in olio al giorno e ET veniva preformato tre giorni dopo sotto guida ecografica addominale come descritto in precedenza. E2 orale e progesterone sono stati continuati fino alla documentazione dell'attività cardiaca fetale mediante ecografia.