Sustitución de transferencias de embriones frescos (ET) por transferencias de embriones congelados (FET) mediante vitrificación

Todas las pacientes de la cohorte inicial fueron tratadas con un protocolo largo de estimulación ovárica. Para la regulación a la baja de la hipófisis, las pacientes fueron tratadas con la administración diaria de 0,5 mg de buserelina (suprefact, Aventis, Frankfurt, Alemania) desde el día 21 del ciclo menstrual. La buserelina se redujo a 0,25 mg diarios cuando los ovarios estaban inactivos en la ecografía y la HOC se inició con FSH recombinante (Gonal F, Serono, Aubnne, Suiza) 150 UI/día el día 2 del sangrado por deprivación. Se utilizaron exámenes de ultrasonido en serie y la evaluación de los niveles séricos de E2 para evaluar la respuesta ovárica, y luego se realizaron los ajustes de la dosis de gonadotropina según fuera necesario. Se administraron 10.000 UI de gonadotropina coriónica humana (pregnyl, Organon, Oss, Países Bajos) cuando al menos dos folículos alcanzaron un diámetro medio de 18 mm.

La recuperación de ovocitos se realizó 34-36 horas después de la administración de hCG y se realizó inseminación convencional o ICSI según fuera clínicamente apropiado.

En 187 pacientes asignadas al grupo de TE fresca, la TE se realizó el día 2. Los embriones se transfirieron bajo guía ecográfica, con un C.C.D. catéter de transferencia de embriones (Laboratorio C.C.D., París, Francia). El soporte lúteo con progesterona en aceite (Progesterona, Aburaihan Co., Teherán, Irán) 100 mg diarios IM se inició el día de la extracción de ovocitos y se continuó hasta la documentación de la actividad cardíaca fetal en la ecografía.

En 187 pacientes asignadas al grupo FET, se llevó a cabo la criopreservación de todos los embriones con vitrificación por el método Cryotop y después de dos meses, se transfirieron los embriones.

El protocolo para la vitrificación de embriones con Cryotop se describió previamente (Kuwayama et al., 2005; Kuwayama, 2007).

Después de una carga de dos pasos con una solución de equilibrio que contiene etilenglicol al 7,5 % (v/v) y sulfóxido de dimetilo al 7,5 % (v/v), y una solución de vitrificación que contiene etilenglicol al 15 % (v/v), etilenglicol al 15 % (v/v) ) dimetilsulfóxido y 0,5 mol/L de sacarosa, los embriones se cargaron con un capilar de vidrio estrecho en el Cryotop en un volumen de < 0,1 µL. Después de la carga, se eliminó casi toda la solución para dejar solo una capa delgada que cubriera los embriones, y la muestra se sumergió rápidamente en nitrógeno líquido (LN). Posteriormente, la tapa de plástico se colocó sobre la parte de la película del Cryotop y la muestra se almacenó bajo LN. Durante el calentamiento, se retiró la tapa protectora del Cryotop mientras aún estaba sumergido en LN y el Cryotop se sumergió directamente en un medio a 37 °C que contenía sacarosa. A continuación, los embriones se incubaron secuencialmente en una solución diluyente antes de continuar con el cultivo in vitro para la transferencia.

Las pacientes se prepararon para TE con E2 oral para lograr un grosor endometrial ≥ 8 mm y un patrón de triple línea en las ecografías. En ese momento, los pacientes recibieron 100 mg de progesterona IM en aceite todos los días y tres días después se realizó la ET bajo guía de ultrasonido abdominal como se describió anteriormente. Se continuó con E2 oral y progesterona hasta que se documentó la actividad cardíaca fetal mediante ultrasonografía.