Substituição de transferências de embriões frescos (ETs) por transferências de embriões congelados (FETs) usando vitrificação

Todas as pacientes da coorte inicial foram tratadas com protocolo longo para estimulação ovariana. Para a regulação negativa da hipófise, as pacientes foram tratadas com administração diária de 0,5 mg de buserelina (suprefact, Aventis, Frankfurt, Alemanha) a partir do dia 21 do ciclo menstrual. A buserelina foi reduzida para 0,25 mg por dia quando os ovários estavam quiescentes no ultrassom e a COH foi iniciada com FSH recombinante (Gonal F, Serono, Aubnne, Suíça) 150 UI/dia no dia 2 do sangramento de privação. Exames ultrassonográficos seriados e avaliação dos níveis séricos de E2 foram usados ​​para avaliar a resposta ovariana e, em seguida, ajustes de dose de gonadotrofina foram feitos conforme necessário. Gonadotrofina coriônica humana (pregnyl, Organon, Oss, Holanda) 10.000 UI foi administrada quando pelo menos dois folículos atingiram um diâmetro médio de 18 mm.

A recuperação de oócitos foi realizada 34-36 horas após a administração de hCG e inseminação convencional ou ICSI foi realizada conforme clinicamente apropriado.

Em 187 pacientes alocados para o grupo ET fresco, ET foi realizado no dia 2. Os embriões foram transferidos sob orientação de ultrassom, com um C.C.D. cateter de transferência de embriões (Laboratory C.C.D., Paris, França). O suporte lúteo com progesterona em óleo (Progesterona, Aburaihan Co., Teerã, Irã) 100 mg diários IM foi iniciado no dia da coleta do oócito e continuou até a documentação da atividade cardíaca fetal no ultrassom.

Em 187 pacientes alocados no grupo FET, todos os embriões foram criopreservados com vitrificação pelo método Cryotop e após dois meses, os embriões foram transferidos.

O protocolo para a vitrificação Cryotop de embriões foi descrito anteriormente (Kuwayama et al., 2005; Kuwayama, 2007).

Após um carregamento em duas etapas com solução de equilíbrio contendo 7,5% (v/v) de etilenoglicol e 7,5% (v/v) de dimetilsulfóxido e solução de vitrificação contendo 15% (v/v) de etilenoglicol, 15% (v/v ) dimetil sulfóxido e 0,5 mol/L de sacarose, os embriões foram carregados com um capilar de vidro estreito no Cryotop em um volume de < 0,1 µL . Após o carregamento, quase toda a solução foi removida para deixar apenas uma fina camada cobrindo os embriões, e a amostra foi rapidamente imersa em nitrogênio líquido (LN). Posteriormente, a tampa plástica foi puxada sobre a parte do filme do Cryotop e a amostra foi armazenada sob LN. No aquecimento, a tampa protetora foi removida do Cryotop enquanto ainda estava submerso em LN e o Cryotop foi imerso diretamente em um meio contendo sacarose a 37˚C. Os embriões foram então incubados sequencialmente em solução de diluentes antes da cultura in vitro para transferência.

As pacientes foram preparadas para TE com E2 oral para atingir espessura endometrial ≥ 8 mm e padrão de linha tripla em exames de ultrassom. Naquela época, os pacientes receberam 100 mg de progesterona IM em óleo diariamente e o TE foi realizado três dias depois sob orientação de ultrassom abdominal, conforme descrito anteriormente. E2 oral e progesterona foram continuados até a documentação da atividade cardíaca fetal por ultrassonografia.