Ersättning av färska embryoöverföringar (ET) med frysta embryoöverföringar (FET) med hjälp av vitrifikation

Alla patienter i den initiala kohorten behandlades med långt protokoll för äggstocksstimulering. För hypofysnedreglering behandlades patienter med daglig administrering av 0,5 mg buserelin (suprefact, Aventis, Frankfurt, Tyskland) från dag 21 av menstruationscykeln. Buserelin reducerades till 0,25 mg dagligen när äggstockarna var vilande på ultraljud, och COH initierades med rekombinant FSH (Gonal F, Serono, Aubnne, Schweiz) 150 IE/dag på dag 2 av utsättningsblödning. Seriella ultraljudsundersökningar och utvärdering av E2-nivåer i serum användes för att bedöma äggstockssvar, och sedan justerades gonadotropindosen efter behov. Humant koriongonadotropin (pregnyl, Organon, Oss, Nederländerna) 10 000 IE administrerades när minst två folliklar nådde en medeldiameter på 18 mm.

Oocytåtervinning utfördes 34-36 timmar efter hCG-administrering och konventionell insemination eller ICSI utfördes som kliniskt lämpligt.

Hos 187 patienter som tilldelats färsk ET-grupp utfördes ET på dag 2. Embryon överfördes under ultraljudsledning, med en C.C.D. embryoöverföringskateter (Laboratory C.C.D., Paris, Frankrike). Lutealt stöd med progesteron i olja (Progesterone, Aburaihan Co., Teheran, Iran) 100 mg dagligen IM påbörjades på dagen för oocythämtning och fortsatte tills dokumentationen av fostrets hjärtaktivitet på ultraljud.

Hos 187 patienter allokerade till FET-gruppen genomfördes kryokonservering av alla embryon med förglasning med Cryotop-metoden och efter två månader överfördes embryon.

Protokollet för Cryotop-vitrifiering av embryon har beskrivits tidigare (Kuwayama et al., 2005; Kuwayama, 2007).

Efter en tvåstegsladdning med jämviktslösning innehållande 7,5 % (v/v) etylenglykol och 7,5 % (v/v) dimetylsulfoxid, och förglasningslösning innehållande 15 % (v/v) etylenglykol, 15 % (v/v) ) dimetylsulfoxid och 0,5 mol/L sackaros, embryon laddades med en smal glaskapillär på Cryotop i en volym av < 0,1 µL. Efter laddning avlägsnades nästan all lösning för att lämna kvar ett tunt skikt som täckte embryona, och provet sänktes snabbt ned i flytande kväve (LN). Därefter drogs plastlocket över filmdelen av Cryotop, och provet förvarades under LN. Vid uppvärmning togs skyddslocket bort från Cryotop medan den fortfarande var nedsänkt i LN och Cryotop nedsänktes direkt i ett 37˚C medium innehållande sackaros. Embryona inkuberades sedan sekventiellt i utspädningslösning innan ytterligare in vitro-odling för överföring.

Patienterna förbereddes för ET med oral E2 för att uppnå endometrietjocklek ≥ 8 mm och trippellinjemönster på ultraljudsskanningar. Vid den tiden gavs patienterna 100 mg IM progesteron i olja dagligen och ET förformades tre dagar senare under bukens ultraljudsledning som beskrivits tidigare. Oral E2 och progesteron fortsattes tills dokumentation av fostrets hjärtaktivitet genom ultraljud.