Nahrazení přenosů čerstvých embryí (ET) přenosy zmrazených embryí (FET) pomocí vitrifikace

Všechny pacientky v počáteční kohortě byly léčeny dlouhým protokolem pro ovariální stimulaci. Pro down-regulaci hypofýzy byly pacientky léčeny denním podáváním 0,5 mg buserelinu (suprefact, Aventis, Frankfurt, Německo) od 21. dne menstruačního cyklu. Buserelin byl snížen na 0,25 mg denně, když byly vaječníky na ultrazvuku v klidu, a COH byla zahájena rekombinantním FSH (Gonal F, Serono, Aubnne, Švýcarsko) 150 IU/den 2. den krvácení z vysazení. K posouzení ovariální odpovědi byla použita sériová ultrazvuková vyšetření a vyhodnocení sérových hladin E2 a poté byly podle potřeby upraveny dávky gonadotropinu. Lidský choriový gonadotropin (pregnyl, Organon, Oss, Nizozemsko) 10 000 IU byl podán, když alespoň dva folikuly dosáhly středního průměru 18 mm.

Odběr oocytů byl proveden 34-36 hodin po podání hCG a konvenční inseminace nebo ICSI byla provedena podle klinicky vhodného stavu.

U 187 pacientů zařazených do skupiny s čerstvou ET byla ET provedena 2. den. Embrya byla přenesena pod ultrazvukovou kontrolou s C.C.D. katetr pro přenos embryí (Laboratory C.C.D., Paříž, Francie). Luteální podpora progesteronem v oleji (Progesteron, Aburaihan Co., Teherán, Írán) 100 mg denně IM byla zahájena v den odběru oocytů a pokračovala až do dokumentace srdeční aktivity plodu na ultrazvuku.

U 187 pacientů zařazených do skupiny FET byla provedena kryokonzervace všech embryí s vitrifikací metodou Cryotop a po dvou měsících byla embrya transferována.

Protokol pro kryotopovou vitrifikaci embryí byl popsán dříve (Kuwayama et al., 2005; Kuwayama, 2007).

Po dvoustupňovém naplnění ekvilibračním roztokem obsahujícím 7,5 % (v/v) ethylenglykolu a 7,5 % (v/v) dimethylsulfoxidu a vitrifikačním roztokem obsahujícím 15 % (v/v) ethylenglykolu, 15 % (v/v) dimethylsulfoxidu a 0,5 mol/l sacharózy byla embrya nanesena úzkou skleněnou kapilárou na Cryotop v objemu < 0,1 ul. Po naložení byl téměř všechen roztok odstraněn, aby zůstala pouze tenká vrstva pokrývající embrya, a vzorek byl rychle ponořen do kapalného dusíku (LN). Následně bylo plastové víčko přetaženo přes filmovou část Cryotop a vzorek byl uložen pod LN. Při zahřívání bylo z Cryotopu odstraněno ochranné víčko, zatímco byl stále ponořen v LN, a Cryotop byl ponořen přímo do 37˚C média obsahujícího sacharózu. Embrya byla poté postupně inkubována v roztoku ředidel před další kultivací in vitro pro přenos.

Pacientky byly připraveny na ET s orálním E2, aby dosáhly tloušťky endometria ≥ 8 mm a vzoru tří čar na ultrazvukových skenech. V té době bylo pacientům podáváno 100 mg IM progesteronu v oleji denně a ET byla provedena o tři dny později pod vedením břišního ultrazvuku, jak bylo popsáno dříve. Orální podávání E2 a progesteronu pokračovalo až do dokumentace srdeční aktivity plodu ultrasonografií.