Vervanging van Fresh Embryo Transfers (ET's) door Frozen Embryo Transfers (FET's) met behulp van vitrificatie

Alle patiënten in het eerste cohort werden behandeld met een lang protocol voor ovariële stimulatie. Voor neerwaartse regulatie van de hypofyse werden patiënten behandeld met dagelijkse toediening van 0,5 mg busereline (suprefact, Aventis, Frankfurt, Duitsland) vanaf dag 21 van de menstruatiecyclus. Busereline werd verlaagd tot 0,25 mg per dag wanneer de eierstokken op echografie in rust waren, en COH werd gestart met recombinant FSH (Gonal F, Serono, Aubnne, Zwitserland) 150 IE/dag op dag 2 van de dervingsbloeding. Seriële echografie-onderzoeken en evaluatie van serum E2-spiegels werden gebruikt om de ovariële respons te beoordelen, en vervolgens werden de dosering van gonadotropine naar behoefte aangepast. Humaan choriongonadotrofine (pregnyl, Organon, Oss, Nederland) 10.000 IE werd toegediend wanneer ten minste twee follikels een gemiddelde diameter van 18 mm bereikten.

Het ophalen van eicellen werd 34-36 uur na hCG-toediening uitgevoerd en conventionele inseminatie of ICSI werd uitgevoerd zoals klinisch aangewezen.

Bij 187 patiënten die waren toegewezen aan de verse ET-groep, werd ET uitgevoerd op dag 2. Embryo's werden overgebracht onder echogeleide, met een C.C.D. embryotransferkatheter (Laboratory CCD, Parijs, Frankrijk). Luteale ondersteuning met progesteron in olie (Progesteron, Aburaihan Co., Teheran, Iran) 100 mg per dag IM werd gestart op de dag van het ophalen van eicellen en voortgezet tot de documentatie van foetale hartactiviteit op echografie.

Bij 187 patiënten die waren toegewezen aan de FET-groep, werden alle embryo's ingevroren met vitrificatie volgens de Cryotop-methode en na twee maanden werden de embryo's teruggeplaatst.

Het protocol voor de Cryotop-vitrificatie van embryo's is eerder beschreven (Kuwayama et al., 2005; Kuwayama, 2007).

Na een belading in twee stappen met een equilibratieoplossing die 7,5% (v/v) ethyleenglycol en 7,5% (v/v) dimethylsulfoxide bevat, en een verglazingsoplossing die 15% (v/v) ethyleenglycol, 15% (v/v) ) dimethylsulfoxide en 0,5 mol/L sucrose, werden embryo's geladen met een smal glazen capillair op de Cryotop in een volume van < 0,1 µL. Na het laden werd bijna alle oplossing verwijderd om slechts een dunne laag over te laten die de embryo's bedekte, en het monster werd snel ondergedompeld in vloeibare stikstof (LN). Vervolgens werd de plastic dop over het foliegedeelte van de Cryotop getrokken en werd het monster onder LN opgeslagen. Bij het opwarmen werd de beschermkap van de Cryotop verwijderd terwijl deze nog ondergedompeld was in LN en werd de Cryotop direct ondergedompeld in een medium van 37˚C dat sucrose bevatte. De embryo's werden vervolgens achtereenvolgens geïncubeerd in verdunningsoplossing voor verdere in vitro kweek voor overdracht.

Patiënten werden voorbereid op ET met orale E2 om een ​​dikte van het endometrium ≥ 8 mm en een drievoudig lijnenpatroon op echografie te bereiken. Op dat moment kregen patiënten dagelijks 100 mg IM progesteron in olie en drie dagen later werd ET uitgevoerd onder echografische begeleiding van de buik, zoals eerder beschreven. Orale E2 en progesteron werden voortgezet tot documentatie van foetale hartactiviteit door echografie.