Zastąpienie transferów świeżych zarodków (ET) transferami zamrożonych zarodków (FET) przy użyciu witryfikacji

Wszystkie pacjentki z początkowej kohorty były leczone długim protokołem stymulacji jajników. W celu regulacji w dół przysadki pacjentom podawano codziennie 0,5 mg busereliny (suprefact, Aventis, Frankfurt, Niemcy) od 21 dnia cyklu miesiączkowego. Dawkę busereliny zmniejszono do 0,25 mg na dobę, gdy jajniki były spokojne w badaniu ultrasonograficznym, a COH rozpoczęto rekombinowanym FSH (Gonal F, Serono, Aubnne, Szwajcaria) w dawce 150 j.m./dobę w 2. dniu krwawienia z odstawienia. Do oceny odpowiedzi jajników wykorzystano seryjne badania ultrasonograficzne i ocenę poziomu E2 w surowicy, a następnie w razie potrzeby dostosowano dawkę gonadotropin. Ludzką gonadotropinę kosmówkową (pregnyl, Organon, Oss, Holandia) 10 000 IU podano, gdy co najmniej dwa pęcherzyki osiągnęły średnią średnicę 18 mm.

Pobranie oocytów przeprowadzono 34-36 godzin po podaniu hCG i przeprowadzono konwencjonalną inseminację lub ICSI, jeśli było to klinicznie właściwe.

U 187 pacjentów przydzielonych do grupy świeżego ET, ET wykonano w 2. dobie. Transfer zarodków wykonano pod kontrolą USG, z użyciem aparatu C.C.D. cewnik do transferu zarodków (Laboratory C.C.D., Paryż, Francja). Wspomaganie lutealne progesteronem w oleju (Progesterone, Aburaihan Co., Tehran, Iran) 100 mg dziennie IM rozpoczęto w dniu pobrania komórki jajowej i kontynuowano do czasu udokumentowania czynności serca płodu w USG.

U 187 pacjentek przydzielonych do grupy FET podjęto kriokonserwację wszystkich zarodków z witryfikacją metodą Cryotop i po dwóch miesiącach zarodki przeniesiono.

Protokół witryfikacji zarodków Cryotop został opisany wcześniej (Kuwayama i in., 2005; Kuwayama, 2007).

Po dwuetapowym obciążeniu roztworem równoważącym zawierającym 7,5% (v/v) glikolu etylenowego i 7,5% (v/v) sulfotlenku dimetylu oraz roztworem do witryfikacji zawierającym 15% (v/v) glikolu etylenowego, 15% (v/v) ) sulfotlenku dimetylu i 0,5 mol/l sacharozy, zarodki załadowano wąską szklaną kapilarą na Cryotop w objętości < 0,1 µl. Po załadowaniu usunięto prawie cały roztwór pozostawiając jedynie cienką warstwę pokrywającą zarodki, a próbkę szybko zanurzono w ciekłym azocie (LN). Następnie plastikową nasadkę naciągnięto na foliową część Cryotop i próbkę przechowywano pod LN. Podczas podgrzewania, przykrywkę ochronną usunięto z Cryotop, gdy był on jeszcze zanurzony w LN i Cryotop zanurzono bezpośrednio w pożywce o temperaturze 37°C zawierającej sacharozę. Zarodki następnie kolejno inkubowano w roztworze rozcieńczalników przed dalszą hodowlą in vitro w celu przeniesienia.

Pacjentki przygotowywano do ET za pomocą doustnej E2, aby uzyskać grubość endometrium ≥ 8 mm i układ potrójnej linii w badaniu USG. W tym czasie pacjentom podawano codziennie 100 mg progesteronu domięśniowo w oleju, a ET wykonano trzy dni później pod kontrolą USG jamy brzusznej, jak opisano wcześniej. Doustne podawanie E2 i progesteronu kontynuowano do czasu udokumentowania czynności serca płodu za pomocą ultrasonografii.