Rituksimabin (RTx) induktion ja elävän luovutuksen vaikutus immunosäätelyyn ja virusten torjuntaan munuaissiirrossa

Tavoite. Veriryhmän kanssa yhteensopimaton (ABOi) LD-munuaisensiirto on tunnustettu hoitomuoto Saksassa. Tässä tilanteessa eettiset näkökohdat mahdollistavat yksityiskohtaisen tutkimuksen Rtx-induktiohoidon lyhyt- ja pitkäaikaisista immunologisista ja virologisista vaikutuksista, mukaan lukien peräkkäiset protokollabiopsiat. Ehdotetussa hankkeessa teemme perifeerisen veren, suoliluun imusolmukkeiden analyyseja ja protokollabiopsioita. Protokollabiopsiat otetaan rutiininomaisesti 3 ja 12 kuukautta siirron jälkeen Giessenin ja Freiburgin yliopistoissa. Tässä prospektiivisessa avoimessa pilottitutkimuksessa siirteen lopputuloksen ja polyoomaviruksen, EBV:n ja CMV:n replikaation kontrollin immunologisia parametreja verrataan RTx-käsiteltyjen ABOi LD-munuaisensiirron saajien (n=25-30, ryhmä 1) ja veriryhmän kanssa yhteensopivan LD-munuaisen välillä. elinsiirtojen vastaanottajat, joilla ei ole Rtx-induktiota (n = 25-30, ryhmä 2), mutta muuten vertailukelpoinen immunosuppressiivinen hoito (MPS ja Tacr, vaihto Tacr-MR:ään (modifioitu vapautuminen) 2 viikon kuluessa siirrosta; seuranta 5 vuotta). Samat analyysit tehdään DD-munuaisensiirron saajille, joita hoidetaan Tacrilla (vaihda Tacr-ME:hen) ja MPS:llä (n=25-30, ryhmä 3). Tämä tutkimussuunnitelma antaa mahdollisuuden analysoida elävän luovutuksen vaikutusta immuunisäätelyyn ja virustorjuntaan (ryhmät 2 vs. 3).

Tausta. On olemassa kasvavaa näyttöä siitä, että humoraalisilla mekanismeilla on tärkeä rooli kroonisessa allograftin toimintahäiriössä, jonka osoitettiin liittyvän merkittävästi luovuttajaspesifisten vasta-aineiden de novo muodostumiseen ihmisen leukosyyttiantigeenejä (HLA) vastaan. B-solut näyttävät kuitenkin toimivan ei vain humoraalisissa vasteissa siirrettä vastaan, vaan niillä voi olla merkittävä rooli T-soluvälitteisissä antidonorivasteissa, koska ne ovat tehokkaita antigeeniä esitteleviä soluja. Tähän viittaa lisäksi se tosiasia, että Rtx on tehokas ensisijaisesti T-soluvälitteisissä sairauksissa, kuten nivelreumassa tai multippeliskleroosissa.

Hypoteesi / erityistavoitteet. Oletamme, että Rtx-induktio voi muuttaa immunosäätelyä lyhyellä ja pitkällä aikavälillä munuaisensiirron jälkeen, mikä voi parantaa pitkän aikavälin tulosta. Rtx-induktion siirteitä suojaavat vaikutukset voivat johtua B-solujen ehtymisestä ja siitä aiheutuvista vaikutuksista humoraalisiin sekä T-soluvasteisiin, ja myös muuttuneilla vasteilla B-solujen uudelleenpopulaation jälkeen. Rtx:n mahdolliset negatiiviset vaikutukset polyoomavirukseen ja CMV-kontrolliin sekä suojaavat vaikutukset EBV:n replikaatioon, de novo monoklonaaliseen gammopatiaan ja lymfooman kasvutekijöiden (interleukiinit 6 ja 10 (IL-6, IL-10)) säätelyyn analysoidaan. Lisäksi ääreisveren B-solujen alajoukkoanalyysi ja Rtx:n todennäköisesti siihen liittyvä vaikutus B-solujen vähenemiseen siirteen tyhjentävissä suoliluun imusolmukkeissa voivat auttaa meitä määrittämään optimoidun Rtx-annoksen ja mahdollistaa siten onnistuneen ABOi-munuaisensiirron ilman tällä hetkellä havaittuja 15 %:n poistumista. .

Alustavat tulokset. Olemme suorittaneet kliinisiä tutkimuksia, jotka osoittavat immuuniparametrien, kuten säätelevien anti-Fab-autovasta-aineiden, sCD30:n, CD4:n (erilaisryhmä 4) auttajatoiminnan ja CD4-solujen IL-4:n (interleukiini 4) ja IL-10:n (interleukiini 10), ennustavan voiman. vastaukset siirteen tuloksiin. Rtx-induktiohoidon ja elävän luovutuksen pitkän aikavälin vaikutusta näihin parametreihin analysoidaan.

Aiemmin havaitsimme, että potilaat, joilla on polyoomaviruksen nefropatian riski, voidaan tunnistaa varhaisessa transplantaation jälkeisessä peräkkäisessä käänteiskopioijapolymeraasiketjun (rt-PCR) arvioinnissa polyomaviruksen replikaatiosta virtsassa. Polyomaviruksen replikaation virtsassa ja plasmassa peräkkäistä rt-PCR-testausta käytetään analysoimaan Rtx-induktion vaikutuksia polyoomaviruksen torjuntaan.

Ehdotetut menetelmät. Immuuniparametrit analysoidaan pääasiassa ennen siirtoa, 3 kuukautta ja 1, 2 ja 5 vuotta siirron jälkeen. Virtaussytometria (mukaan lukien säätelevät T-solut, B-solujen alajoukot, sytokiinireseptorien ilmentyminen, kostimulaatio- ja adheesiomolekyylit), mitogeeni-stimuloidut allogeeniset yhteisviljelmät, proteiini-A plakkimääritys (B-soluvasteet, CD4-auttajaaktiivisuus), solunsisäinen CD4+:n sytokiinianalyysi ja CD8+ (klusteri differentiaatio 8) T-soluja, B-soluja ja monosyytit, rt-PCR virologisiin tutkimuksiin (BKV, JCV, CMV, EBV) ja suoliluun imusolmukkeiden immunofluoresoiva värjäys (saatu siirron yhteydessä) ja protokollabiopsiat käytetään. . Luovuttajaspesifiset vasta-aineet havaitaan käyttämällä lymfosytotoksisuutta, HLA-luokan I ja II ELISA- ja Luminex-määrityksiä. Luovuttajaspesifisyys varmistetaan T- ja B-solujen ristisovituksella luovuttajasolujen kanssa. Säätelevät IgG (immunoglobuliini G) ja IgA (immunoglobuliini A) anti-Fab-autovasta-aineet, neopteriini ja sCD30 arvioidaan ELISA:lla.

Odotetut tulokset. Odotamme, että Rtx-induktiolla on vaikutusta siirteen tuloksen immunologisiin parametreihin, kuten de-novo posttransplant-antidonor HLA-vasta-aineen muodostumiseen. Tämä pilottitutkimus voi mahdollistaa paremman pitkän aikavälin munuaissiirteen tuloksen vastaanottajilla, joilla on immunologiset riskiparametrit potilaalle räätälöidyn immunosuppressiivisen hoidon ansiosta. ABOi-munuaisensiirrossa tämä tutkimus voi estää nykyisen 15 %:n poistumisasteen sallimalla optimoidun Rtx-annoksen, joka perustuu aiottuun annosvasteanalyysiin (B-solujen alajoukon analyysi verestä ja siirteen tyhjennysimusolmukkeista). Lisäksi tämä tutkimus mahdollistaa Rtx:n antamisen riskin arvioinnin CMV:n ja polyoomaviruksen replikaation suhteen ja voi tarjota vihjeitä suojasta EBV:n replikaatiota ja transplantaation jälkeistä lymfoproliferatiivista sairautta vastaan. Jälkimmäisellä pisteellä on suuri kliininen merkitys potilailla, joilla on lisääntynyt PTLD (posttransplant lymphoproliferative disease) -riski, kuten EBV-negatiiviset EBV-positiivisten siirteiden vastaanottajat.