Effekten av rituximab (RTx) induktion och levande donation på immunreglering och viruskontroll vid njurtransplantation

Mål. Blodgruppsinkompatibel (ABOi) LD-njurtransplantation representerar en erkänd behandlingsmodalitet i Tyskland. I den här miljön möjliggör etiska överväganden en detaljerad studie av kort- och långtidsimmunologiska och virologiska effekter av Rtx-induktionsterapi, inklusive biopsier med sekventiell protokoll. I det föreslagna projektet kommer vi att utföra analyser av perifert blod, iliacala lymfkörtlar och protokollbiopsier. Protokollbiopsier erhålls rutinmässigt 3 och 12 månader efter transplantation vid universiteten i Giessen och Freiburg. I denna prospektiva, öppna pilotstudie kommer immunologiska parametrar för transplantatresultat och kontroll av polyomavirus, EBV- och CMV-replikation att jämföras mellan RTx-behandlade ABOi LD-njurtransplanterade (n=25-30, grupp 1) och blodgruppskompatibel LD-njure transplanterade utan Rtx-induktion (n=25-30, grupp 2) men i övrigt jämförbar immunsuppressiv behandling (MPS och Tacr, byt till Tacr-MR (modifierad frisättning) inom 2 veckor efter transplantation; uppföljning på 5 år). Samma analyser kommer att göras hos DD-njurtransplanterade behandlade med Tacr (byte till Tacr-ME) och MPS (n=25-30, grupp 3). Denna studiedesign gör det möjligt att analysera effekten av levande donation på immunreglering och viruskontroll (grupp 2 mot 3).

Bakgrund. Det finns växande bevis för att humorala mekanismer spelar en viktig roll vid kronisk allograftdysfunktion, vilket visade sig vara signifikant associerat med de-novo bildning av donatorspecifika antikroppar mot humana leukocytantigener (HLA). Emellertid verkar B-celler agera inte bara i humorala svar mot transplantatet utan kan spela en signifikant roll i T-cellsmedierade antidonatorsvar på grund av deras roll som effektiva antigenpresenterande celler. Detta antyds ytterligare av det faktum att Rtx är effektivt vid främst T-cellsmedierade sjukdomar såsom reumatoid artrit eller multipel skleros.

Hypotes/specifika syften. Vi antar att Rtx-induktion kan förändra immunregleringen på kort och lång sikt efter njurtransplantation med potential att förbättra det långsiktiga resultatet. Transplantatskyddande effekter av Rtx-induktion kan tillhandahållas av B-cellsutarmning och de resulterande effekterna på humorala såväl som T-cellssvar, och även genom förändrade svar efter B-cellsrepopulation. Möjliga negativa effekter av Rtx på polyomavirus och CMV-kontroll samt skyddande effekter på EBV-replikation, de-novo monoklonal gammopati och reglering av lymfomtillväxtfaktorer (interleukiner 6 och 10 (IL-6, IL-10)) kommer att analyseras. Dessutom kan B-cellsundergruppsanalys i perifert blod och den troligtvis associerade effekten av Rtx på B-cellsutarmning i transplantatdränerande höftbenslymfkörtlar göra det möjligt för oss att etablera en optimerad Rtx-dos och därigenom möjliggöra framgångsrik ABOi-njurtransplantation utan de för närvarande observerade 15 % avhoppen. .

Preliminära resultat. Vi har utfört kliniska studier som visar den prediktiva kraften hos immunparametrar som regulatoriska anti-Fab-autoantikroppar, sCD30, CD4 (kluster av differentiering 4) hjälparaktivitet och CD4-cell IL-4 (interleukin 4) och IL-10 (interleukin 10) svar på graftresultat. Den långsiktiga effekten av Rtx-induktionsterapi och levande donation på dessa parametrar kommer att analyseras.

Tidigare fann vi att patienter med risk för polyomavirusnefropati kan upptäckas tidigt efter transplantation genom sekventiell omvänd transkriptaspolymeraskedja (rt-PCR) bedömning av polyomavirusreplikation i urin. Sekventiell rt-PCR-testning av polyomavirusreplikation i urin och plasma kommer att användas för att analysera effekterna av Rtx-induktion på polyomaviruskontroll.

Föreslagna metoder. Immunparametrar kommer att analyseras främst före transplantation, 3 månader och 1, 2 och 5 år efter transplantation. Flödescytometri (inklusive regulatoriska T-celler, B-cellsundergrupper, uttryck av cytokinreceptorer, samstimulerande och adhesionsmolekyler), mitogenstimulerade allogena samkulturer, protein-A-plackanalys (B-cellsvar, CD4-hjälparaktivitet), intracellulär cytokinanalys av CD4+ och CD8+ (kluster av differentiering 8) T-celler, B-celler och monocyter, rt-PCR för virologiska studier (BKV, JCV, CMV, EBV) och immunofluorescerande färgning av höftbenslymfkörtlar (erhållna vid tidpunkten för transplantation) och protokollbiopsier kommer att användas . Givarspecifika antikroppar kommer att detekteras med hjälp av lymfocytotoxicitet, HLA klass I och II ELISA och Luminex-analyser. Givarspecificitet kommer att bekräftas genom korsmatchning av T- och B-celler med donatorceller. Regulatoriska IgG (immunoglobulin G) och IgA (immunoglobulin A) anti-Fab autoantikroppar, neopterin och sCD30 kommer att bedömas med ELISA.

Förväntade resultat. Vi förväntar oss att Rtx-induktion kommer att visa en inverkan på immunologiska parametrar för transplantatresultat, såsom de-novo posttransplantation av antidonator-HLA-antikroppsbildning. Denna pilotstudie kan möjliggöra förbättrat långsiktigt njurtransplantatresultat hos mottagare med immunologiska riskparametrar tack vare patientanpassad immunsuppressiv terapi. Vid ABOi njurtransplantation kan denna studie förhindra nuvarande 15 % avhopp genom att tillåta en optimerad Rtx-dos baserad på den avsedda dosresponsanalysen (analys av B-cellsundergrupper i blod- och transplantatdränerande lymfkörtlar). Dessutom kommer denna studie att möjliggöra riskuppskattning av Rtx-administrering med avseende på CMV- och polyomavirusreplikation, och kan ge ledtrådar angående skydd mot EBV-replikation och posttransplantationslymfoproliferativ sjukdom. Den senare punkten är av stor klinisk betydelse hos patienter med en ökad risk för PTLD (posttransplantation lymfoproliferativ sjukdom), såsom EBV-negativa mottagare av EBV-positiva transplantat.