Auswirkungen der Rituximab (RTx)-Induktion und Lebendspende auf die Immunregulation und Viruskontrolle bei der Nierentransplantation

Zielsetzung. Die blutgruppeninkompatible (ABOi) LD-Nierentransplantation ist in Deutschland eine anerkannte Behandlungsmethode. Vor diesem Hintergrund ermöglichen ethische Erwägungen eine detaillierte Untersuchung kurz- und langfristiger immunologischer und virologischer Wirkungen der Rtx-Induktionstherapie, einschließlich sequenzieller Protokollbiopsien. In dem vorgeschlagenen Projekt werden wir Analysen von peripherem Blut, Beckenlymphknoten und Protokollbiopsien durchführen. Protokollbiopsien werden routinemäßig 3 und 12 Monate nach der Transplantation an den Universitäten Gießen und Freiburg entnommen. In dieser prospektiven, offenen Pilotstudie werden immunologische Parameter des Transplantatergebnisses und der Kontrolle der Polyomavirus-, EBV- und CMV-Replikation zwischen RTx-behandelten ABOi LD-Nierentransplantatempfängern (n = 25-30, Gruppe 1) und blutgruppenkompatiblen LD-Nieren verglichen Transplantatempfänger ohne Rtx-Induktion (n=25–30, Gruppe 2), aber ansonsten vergleichbarer immunsuppressiver Behandlung (MPS und Tacr, Umstellung auf Tacr-MR (modifizierte Freisetzung) innerhalb von 2 Wochen nach der Transplantation; Nachbeobachtung von 5 Jahren). Dieselben Analysen werden bei DD-Nierentransplantatempfängern durchgeführt, die mit Tacr (Wechsel zu Tacr-ME) und MPS (n = 25–30, Gruppe 3) behandelt wurden. Dieses Studiendesign erlaubt es, den Einfluss der Lebendspende auf die Immunregulation und Viruskontrolle zu analysieren (Gruppen 2 versus 3).

Hintergrund. Es gibt zunehmend Hinweise darauf, dass humorale Mechanismen eine wichtige Rolle bei der chronischen Allotransplantat-Dysfunktion spielen, von der gezeigt wurde, dass sie signifikant mit der De-novo-Bildung spenderspezifischer Antikörper gegen humane Leukozyten-Antigene (HLA) assoziiert ist. B-Zellen scheinen jedoch nicht nur in humoralen Reaktionen gegen das Transplantat zu wirken, sondern können aufgrund ihrer Rolle als wirksame Antigen-präsentierende Zellen eine bedeutende Rolle in T-Zell-vermittelten Antidonor-Reaktionen spielen. Dies wird ferner durch die Tatsache nahegelegt, dass Rtx bei primär T-Zell-vermittelten Erkrankungen wie rheumatoider Arthritis oder multipler Sklerose wirksam ist.

Hypothese/spezifische Ziele. Wir gehen davon aus, dass die Rtx-Induktion die Immunregulation kurz- und langfristig nach einer Nierentransplantation verändern kann, mit dem Potenzial, das Langzeitergebnis zu verbessern. Transplantat-schützende Wirkungen der Rtx-Induktion können durch B-Zell-Verarmung und die daraus resultierenden Wirkungen auf humorale sowie T-Zell-Antworten und auch durch veränderte Antworten nach B-Zell-Repopulation bereitgestellt werden. Mögliche negative Wirkungen von Rtx auf die Polyomavirus- und CMV-Kontrolle sowie protektive Wirkungen auf die EBV-Replikation, de-novo monoklonale Gammopathie und Regulation von Lymphom-Wachstumsfaktoren (Interleukine 6 und 10 (IL-6, IL-10)) werden analysiert. Darüber hinaus können uns die B-Zell-Untergruppenanalyse im peripheren Blut und der wahrscheinlich damit verbundene Einfluss von Rtx auf die B-Zell-Depletion in transplantatdrainierenden Iliakal-Lymphknoten ermöglichen, eine optimierte Rtx-Dosierung festzulegen und dadurch eine erfolgreiche ABOi-Nierentransplantation ohne die derzeit beobachteten 15% Drop-Outs zu ermöglichen .

Vorläufige Ergebnisse. Wir haben klinische Studien durchgeführt, die die Vorhersagekraft von Immunparametern wie regulatorischen Anti-Fab-Autoantikörpern, sCD30, CD4 (Cluster of Differentiation 4)-Helferaktivität und CD4-Zell-IL-4 (Interleukin 4) und IL-10 (Interleukin 10) zeigen. Antworten auf das Transplantatergebnis. Die Langzeitwirkung der Rtx-Induktionstherapie und der Lebendspende auf diese Parameter wird analysiert.

Zuvor fanden wir heraus, dass Patienten mit einem Risiko für Polyomavirus-Nephropathie früh nach der Transplantation durch sequenzielle Reverse-Transkriptase-Polymerase-Ketten (rt-PCR)-Bewertung der Polyomavirus-Replikation im Urin erkannt werden können. Sequentielle rt-PCR-Tests der Polyomavirus-Replikation in Urin und Plasma werden verwendet, um die Auswirkungen der Rtx-Induktion auf die Polyomavirus-Kontrolle zu analysieren.

Vorgeschlagene Methoden. Immunparameter werden hauptsächlich vor der Transplantation, 3 Monate und 1, 2 und 5 Jahre nach der Transplantation analysiert. Durchflusszytometrie (einschließlich regulatorischer T-Zellen, B-Zell-Subpopulationen, Expression von Zytokinrezeptoren, costimulatorischen und Adhäsionsmolekülen), mitogenstimulierte allogene Kokulturen, Protein-A-Plaque-Assay (B-Zellantworten, CD4-Helferaktivität), intrazelluläre Zytokinanalyse von CD4+ und CD8+ (Cluster of Differentiation 8) T-Zellen, B-Zellen und Monozyten, rt-PCR für virologische Studien (BKV, JCV, CMV, EBV) und Immunfluoreszenzfärbung von Beckenlymphknoten (zum Zeitpunkt der Transplantation erhalten) und Protokollbiopsien werden verwendet . Spenderspezifische Antikörper werden mithilfe von Lymphozytotoxizitäts-, HLA-Klasse-I- und -II-ELISA- und Luminex-Assays nachgewiesen. Die Spenderspezifität wird durch T- und B-Zell-Crossmatch mit Spenderzellen bestätigt. Regulatorische IgG (Immunglobulin G)- und IgA (Immunglobulin A)-Anti-Fab-Autoantikörper, Neopterin und sCD30 werden durch ELISA bestimmt.

Erwartete Ergebnisse. Wir gehen davon aus, dass die Rtx-Induktion einen Einfluss auf die immunologischen Parameter des Transplantatergebnisses haben wird, wie z. B. die De-novo-Anti-Donor-HLA-Antikörperbildung nach der Transplantation. Diese Pilotstudie könnte aufgrund einer auf den Patienten zugeschnittenen immunsuppressiven Therapie zu einem verbesserten langfristigen Nierentransplantationsergebnis bei Empfängern mit immunologischen Risikoparametern führen. Bei der ABOi-Nierentransplantation kann diese Studie die derzeitigen Drop-out-Raten von 15 % verhindern, indem sie eine optimierte Rtx-Dosierung basierend auf der beabsichtigten Dosis-Wirkungs-Analyse (B-Zell-Untergruppenanalyse in Blut und Transplantat-drainierenden Lymphknoten) ermöglicht. Darüber hinaus ermöglicht diese Studie eine Risikoabschätzung der Rtx-Verabreichung in Bezug auf die CMV- und Polyomavirus-Replikation und kann Hinweise zum Schutz vor der EBV-Replikation und der lymphoproliferativen Erkrankung nach der Transplantation liefern. Der letztere Punkt ist von großer klinischer Bedeutung bei Patienten mit erhöhtem PTLD-Risiko (Posttransplantations-lymphoproliferative Erkrankung), wie EBV-negative Empfänger von EBV-positiven Transplantaten.