Влияние индукции ритуксимаба (RTx) и живого донорства на иммунорегуляцию и вирусный контроль при трансплантации почки

Цель. Трансплантация почки при несовместимой группе крови (ABOi) LD представляет собой признанный метод лечения в Германии. В этих условиях этические соображения позволяют детально изучить краткосрочные и долгосрочные иммунологические и вирусологические эффекты индукционной терапии RTX, включая последовательные биопсии по протоколу. В предлагаемом проекте мы будем выполнять анализы периферической крови, подвздошных лимфатических узлов и протокол биопсии. Протокольные биопсии обычно получают через 3 и 12 месяцев после трансплантации в университетах Гиссена и Фрайбурга. В этом проспективном открытом пилотном исследовании иммунологические параметры исхода трансплантации и контроль репликации полиомавируса, EBV и CMV будут сравниваться между реципиентами почечного трансплантата ABOi LD, получавших RTx (n = 25-30, группа 1), и реципиентами почки с совместимой группой крови LD. реципиенты трансплантата без индукции Rtx (n = 25-30, группа 2), но в остальном сопоставимое иммуносупрессивное лечение (MPS и Tacr, переход на Tacr-MR (модифицированное высвобождение) в течение 2 недель после трансплантации; последующее наблюдение в течение 5 лет). Те же анализы будут проведены у реципиентов трансплантата почки с ДД, получавших Tacr (переход на Tacr-ME) и MPS (n=25-30, группа 3). Этот дизайн исследования позволяет проанализировать влияние живого донорства на иммунорегуляцию и контроль вируса (группы 2 против 3).

Фон. Появляется все больше доказательств того, что гуморальные механизмы играют важную роль в хронической дисфункции аллотрансплантата, которая, как было показано, в значительной степени связана с образованием de novo донор-специфических антител против антигенов лейкоцитов человека (HLA). Однако В-клетки, по-видимому, действуют не только в гуморальных реакциях на трансплантат, но могут играть значительную роль в антидонорских реакциях, опосредованных Т-клетками, благодаря своей роли эффективных антигенпрезентирующих клеток. На это также указывает тот факт, что Rtx эффективен в первую очередь при заболеваниях, опосредованных Т-клетками, таких как ревматоидный артрит или рассеянный склероз.

Гипотеза/конкретные цели. Мы предполагаем, что индукция Rtx может изменить иммунорегуляцию в краткосрочной и долгосрочной перспективе после трансплантации почки с потенциалом улучшения долгосрочных результатов. Защитные эффекты трансплантата индукции Rtx могут быть обеспечены истощением В-клеток и результирующим воздействием на гуморальный, а также Т-клеточный ответы, а также измененными ответами после репопуляции В-клеток. Будут проанализированы возможные негативные эффекты Rtx на контроль полиомавируса и ЦМВ, а также защитные эффекты на репликацию EBV, моноклональную гаммапатию de novo и регуляцию факторов роста лимфомы (интерлейкины 6 и 10 (IL-6, IL-10)). Кроме того, анализ подмножества В-клеток в периферической крови и, вероятно, связанное с этим влияние Rtx на истощение B-клеток в трансплантатах, дренирующих подвздошные лимфатические узлы, могут позволить нам установить оптимальную дозу Rtx и тем самым обеспечить успешную трансплантацию почки ABOi без наблюдаемых в настоящее время 15% отсева. .

Предварительные результаты. Мы провели клинические исследования, демонстрирующие прогностическую способность иммунных параметров, таких как регуляторные анти-Fab аутоантитела, sCD30, CD4 (кластер дифференцировки 4), хелперная активность и IL-4 клеток CD4 (интерлейкин 4) и IL-10 (интерлейкин 10). ответы на результаты трансплантации. Будет проанализировано долгосрочное влияние индукционной терапии Rtx и живого донорства на эти параметры.

Ранее мы обнаружили, что пациенты с риском полиомавирусной нефропатии могут быть распознаны в ранние сроки после трансплантации с помощью последовательной оценки репликации полиомавируса в моче с помощью полимеразной цепи с обратной транскриптазой (RT-PCR). Последовательное тестирование репликации полиомавируса в моче и плазме методом RT-PCR будет использоваться для анализа влияния индукции Rtx на контроль полиомавируса.

Предлагаемые методы. Иммунные параметры будут анализироваться в основном до трансплантации, через 3 месяца и через 1, 2 и 5 лет после трансплантации. Проточная цитометрия (включая регуляторные Т-клетки, субпопуляции В-клеток, экспрессию рецепторов цитокинов, костимулирующих и адгезивных молекул), митоген-стимулированные аллогенные сокультуры, анализ бляшек на белок-А (ответы В-клеток, активность CD4-хелперов), анализ внутриклеточных цитокинов CD4+ и CD8+ (кластер дифференцировки 8) Т-клетки, В-клетки и моноциты, ОТ-ПЦР для вирусологических исследований (BKV, JCV, CMV, EBV) и иммунофлуоресцентное окрашивание подвздошных лимфатических узлов (полученных во время трансплантации) и протокольные биопсии . Донор-специфические антитела будут обнаружены с использованием лимфоцитотоксичности, HLA класса I и II ELISA и анализов Luminex. Донорская специфичность будет подтверждена перекрестной совместимостью Т- и В-клеток с донорскими клетками. Регуляторные IgG (иммуноглобулин G) и IgA (иммуноглобулин A), аутоантитела против Fab, неоптерин и sCD30 будут оцениваться с помощью ELISA.

Ожидаемые результаты. Мы ожидаем, что индукция Rtx окажет влияние на иммунологические параметры исхода трансплантата, такие как образование de novo посттрансплантационных антидонорских антител HLA. Это экспериментальное исследование может позволить улучшить долгосрочные результаты трансплантации почки у реципиентов с параметрами иммунологического риска благодаря индивидуальной иммуносупрессивной терапии. При трансплантации почки ABOi это исследование может предотвратить текущие 15% отсева, позволив оптимизировать дозировку Rtx на основе предполагаемого анализа доза-ответ (анализ субпопуляции В-клеток в крови и дренирующих лимфатических узлах трансплантата). Кроме того, это исследование позволит оценить риск введения Rtx в отношении репликации ЦМВ и полиомавируса и может дать ключ к разгадке защиты от репликации ВЭБ и посттрансплантационного лимфопролиферативного заболевания. Последний момент имеет большое клиническое значение у пациентов с повышенным риском ПТЛЗ (посттрансплантационного лимфопролиферативного заболевания), таких как EBV-отрицательные реципиенты EBV-положительных трансплантатов.