Wpływ indukcji rytuksymabu (RTx) i dawstwa od żywych dawców na immunoregulację i kontrolę wirusów w transplantacji nerki

Cel. Przeszczep nerki z niezgodną grupą krwi (ABOi) LD stanowi uznaną metodę leczenia w Niemczech. W tej sytuacji względy etyczne pozwalają na szczegółowe badanie krótko- i długoterminowych skutków immunologicznych i wirusologicznych terapii indukcyjnej Rtx, w tym biopsji według protokołu sekwencyjnego. W proponowanym projekcie będziemy wykonywać analizy krwi obwodowej, węzłów chłonnych biodrowych oraz biopsje protokołowe. Biopsje protokolarne są rutynowo pobierane 3 i 12 miesięcy po przeszczepie na uniwersytetach w Giessen i Fryburgu. W tym prospektywnym, otwartym badaniu pilotażowym zostaną porównane parametry immunologiczne wyników przeszczepu i kontroli replikacji wirusa poliomawirusa, EBV i CMV między biorcami przeszczepu nerki ABOi LD leczonymi RTx (n=25-30, grupa 1) a nerkami LD zgodnymi z grupami krwi biorcy przeszczepów bez indukcji Rtx (n=25-30, grupa 2), ale poza tym porównywalne leczenie immunosupresyjne (MPS i Tacr, zmiana na Tacr-MR (zmodyfikowane uwalnianie) w ciągu 2 tygodni po przeszczepie; obserwacja 5 lat). Te same analizy zostaną przeprowadzone u biorców przeszczepu nerki z DD leczonych Tacr (zmiana na Tacr-ME) i MPS (n=25-30, grupa 3). Ten projekt badania pozwala na analizę wpływu dawców od żywych dawców na immunoregulację i kontrolę wirusa (grupy 2 w porównaniu do 3).

Tło. Istnieje coraz więcej dowodów na to, że mechanizmy humoralne odgrywają główną rolę w przewlekłej dysfunkcji alloprzeszczepu, co, jak wykazano, jest istotnie związane z tworzeniem się de novo swoistych dla dawcy przeciwciał przeciwko antygenom ludzkich leukocytów (HLA). Jednak wydaje się, że komórki B działają nie tylko w odpowiedziach humoralnych przeciwko przeszczepowi, ale mogą odgrywać znaczącą rolę w odpowiedziach antydonorowych, w których pośredniczą komórki T, ze względu na ich rolę jako skutecznych komórek prezentujących antygen. Sugeruje to dodatkowo fakt, że Rtx jest skuteczny w chorobach, w których pośredniczą głównie komórki T, takich jak reumatoidalne zapalenie stawów lub stwardnienie rozsiane.

Hipoteza/konkretne cele. Stawiamy hipotezę, że indukcja Rtx może zmienić krótko- i długoterminową immunoregulację po przeszczepie nerki, co może poprawić długoterminowe wyniki. Ochronne działanie indukcji Rtx na przeszczep może być zapewnione przez wyczerpanie limfocytów B i wynikający z tego wpływ na odpowiedzi humoralne, jak również limfocyty T, a także zmienione odpowiedzi po ponownej populacji limfocytów B. Przeanalizowany zostanie możliwy negatywny wpływ Rtx na kontrolę poliomawirusa i CMV, a także ochronny wpływ na replikację EBV, gammapatię monoklonalną de-novo oraz regulację czynników wzrostu chłoniaka (interleukin 6 i 10 (IL-6, IL-10)). Ponadto analiza podzbioru limfocytów B we krwi obwodowej i prawdopodobnie związany z tym wpływ Rtx na zmniejszenie liczby limfocytów B w biodrowych węzłach chłonnych drenujących przeszczep może umożliwić nam ustalenie optymalnej dawki Rtx, a tym samym umożliwienie pomyślnego przeszczepienia nerki ABOi bez obecnie obserwowanych 15% przypadków rezygnacji .

Wstępne rezultaty. Przeprowadziliśmy badania kliniczne wykazujące moc predykcyjną parametrów immunologicznych, takich jak autoprzeciwciała regulatorowe anty-Fab, sCD30, aktywność pomocnicza CD4 (klaster różnicowania 4) oraz komórkowa IL-4 (interleukina 4) i IL-10 (interleukina 10) w komórkach CD4. odpowiedzi na wynik przeszczepu. Przeanalizowany zostanie długoterminowy wpływ terapii indukcyjnej Rtx i dawców żywych na te parametry.

Wcześniej stwierdziliśmy, że pacjentów zagrożonych nefropatią poliomawirusową można rozpoznać wcześnie po przeszczepie przez sekwencyjną ocenę łańcucha polimerazy odwrotnej transkryptazy (rt-PCR) replikacji poliomawirusa w moczu. Sekwencyjne testy rt-PCR replikacji poliomawirusa w moczu i osoczu zostaną wykorzystane do analizy wpływu indukcji Rtx na kontrolę poliomawirusa.

Proponowane metody. Parametry immunologiczne będą analizowane głównie przed przeszczepem, 3 miesiące oraz 1, 2 i 5 lat po przeszczepie. Cytometria przepływowa (w tym regulatorowe limfocyty T, podzbiory limfocytów B, ekspresja receptorów cytokin, cząsteczki kostymulujące i adhezyjne), kokultury allogeniczne stymulowane mitogenem, test blaszek białkowych A (odpowiedzi limfocytów B, aktywność pomocnicza CD4), analiza wewnątrzkomórkowych cytokin CD4+ i CD8+ (klaster różnicowania 8) limfocytów T, limfocytów B i monocytów, rt-PCR do badań wirusologicznych (BKV, JCV, CMV, EBV) oraz barwienie immunofluorescencyjne węzłów chłonnych biodrowych (uzyskanych w czasie przeszczepu) i biopsje protokołu . Przeciwciała specyficzne dla dawcy zostaną wykryte za pomocą testów limfocytotoksyczności, HLA klasy I i II ELISA oraz testów Luminex. Specyficzność dawcy zostanie potwierdzona przez krzyżowe dopasowanie komórek T i B z komórkami dawcy. Regulacyjne IgG (immunoglobulina G) i IgA (immunoglobulina A) autoprzeciwciała anty-Fab, neopteryna i sCD30 zostaną ocenione za pomocą testu ELISA.

Oczekiwane rezultaty. Oczekujemy, że indukcja Rtx wykaże wpływ na parametry immunologiczne wyniku przeszczepu, takie jak potransplantacyjne tworzenie przeciwciał antydonorowych HLA de novo. To badanie pilotażowe może pozwolić na poprawę długoterminowego wyniku przeszczepu nerki u biorców z parametrami ryzyka immunologicznego dzięki dostosowanej do pacjenta terapii immunosupresyjnej. W przypadku przeszczepu nerki ABOi badanie to może zapobiec obecnemu 15% wskaźnikowi rezygnacji, umożliwiając zoptymalizowane dawkowanie Rtx w oparciu o zamierzoną analizę odpowiedzi na dawkę (analiza podzbioru komórek B we krwi i węzłach chłonnych drenujących przeszczep). Ponadto badanie to pozwoli na oszacowanie ryzyka podania Rtx w odniesieniu do replikacji CMV i poliomawirusa oraz może dostarczyć wskazówek dotyczących ochrony przed replikacją EBV i potransplantacyjną chorobą limfoproliferacyjną. Ta ostatnia kwestia ma ogromne znaczenie kliniczne u pacjentów ze zwiększonym ryzykiem PTLD (potransplantacyjnej choroby limfoproliferacyjnej), takich jak biorcy EBV-ujemni przeszczepów EBV-dodatnich.