Vliv indukce rituximabu (RTx) a živého dárcovství na imunoregulaci a kontrolu virů při transplantaci ledvin

Objektivní. Transplantace ledvin LD inkompatibilní s krevní skupinou (ABOi) představuje v Německu uznávanou léčebnou modalitu. V tomto prostředí umožňují etické úvahy podrobné studium krátkodobých a dlouhodobých imunologických a virologických účinků indukční terapie Rtx, včetně sekvenčních protokolárních biopsií. V navrhovaném projektu budeme provádět analýzy periferní krve, iliakálních lymfatických uzlin a protokolární biopsie. Protokolní biopsie se běžně odebírají 3 a 12 měsíců po transplantaci na univerzitách v Giessenu a Freiburgu. V této prospektivní, otevřené pilotní studii budou porovnány imunologické parametry výsledku štěpu a kontrola replikace polyomaviru, EBV a CMV mezi příjemci ledvinového transplantátu ABOi LD léčenými RTx (n=25-30, skupina 1) a LD ledvinami kompatibilními s krevní skupinou příjemci transplantátu bez indukce Rtx (n=25-30, skupina 2), ale jinak srovnatelné imunosupresivní léčby (MPS a Tacr, přejít na Tacr-MR (modifikované uvolňování) do 2 týdnů po transplantaci; sledování 5 let). Stejné analýzy budou provedeny u příjemců DD ledvinového transplantátu léčených Tacr (přechod na Tacr-ME) a ​​MPS (n=25-30, skupina 3). Tento design studie umožňuje analyzovat dopad dárcovství od žijících dárců na imunoregulaci a kontrolu virů (skupiny 2 versus 3).

Pozadí. Existuje stále více důkazů, že humorální mechanismy hrají hlavní roli v chronické dysfunkci aloštěpu, která je významně spojena s de-novo tvorbou dárcovských specifických protilátek proti lidským leukocytárním antigenům (HLA). Zdá se však, že B buňky působí nejen v humorálních odpovědích proti štěpu, ale mohou hrát významnou roli v antidonorových odpovědích zprostředkovaných T-buňkami kvůli jejich roli jako účinných buněk prezentujících antigen. To dále naznačuje skutečnost, že Rtx je účinný u onemocnění zprostředkovaných primárně T-buňkami, jako je revmatoidní artritida nebo roztroušená skleróza.

Hypotéza/specifické cíle. Předpokládáme, že indukce Rtx může krátkodobě i dlouhodobě změnit imunoregulaci po transplantaci ledviny s potenciálem zlepšit dlouhodobý výsledek. Ochranné účinky indukce Rtx na štěp mohou být zajištěny deplecí B buněk a výslednými účinky na humorální i T buněčné odpovědi a také změněnými odpověďmi po repopulaci B buněk. Budou analyzovány možné negativní účinky Rtx na kontrolu polyomaviru a CMV a také ochranné účinky na replikaci EBV, de-novo monoklonální gamapatii a regulaci lymfomových růstových faktorů (interleukiny 6 a 10 (IL-6, IL-10)). Kromě toho analýza podskupiny B buněk v periferní krvi a pravděpodobně související dopad Rtx na depleci B buněk v iliakálních lymfatických uzlinách s drenáží štěpu nám může umožnit stanovit optimalizované dávkování Rtx a tím umožnit úspěšnou transplantaci ledvin ABOi bez aktuálně pozorovaných 15% výpadků .

Předběžné výsledky. Provedli jsme klinické studie ukazující prediktivní sílu imunitních parametrů, jako jsou regulační anti-Fab autoprotilátky, pomocná aktivita sCD30, CD4 (shluk diferenciace 4) a buněčný IL-4 (interleukin 4) a IL-10 (interleukin 10) CD4. reakce na výsledek štěpu. Bude analyzován dlouhodobý vliv indukční terapie Rtx a dárcovství od žijících dárců na tyto parametry.

Dříve jsme zjistili, že pacienti s rizikem polyomavirové nefropatie mohou být rozpoznáni časně po transplantaci sekvenčním hodnocením replikace polyomaviru v moči sekvenční reverzní transkriptázovou polymerázou (rt-PCR). Sekvenční rt-PCR testování replikace polyomaviru v moči a plazmě bude použito k analýze účinků indukce Rtx na kontrolu polyomaviru.

Navrhované metody. Imunitní parametry budou analyzovány především před transplantací, 3 měsíce a 1, 2 a 5 let po transplantaci. Průtoková cytometrie (včetně regulačních T buněk, podskupin B buněk, exprese cytokinových receptorů, kostimulačních a adhezních molekul), mitogenem stimulované alogenní kokultury, protein-A plakový test (odpovědi B buněk, CD4 pomocná aktivita), intracelulární cytokinová analýza CD4+ a Budou použity CD8+ (shluk diferenciace 8) T buňky, B buňky a monocyty, rt-PCR pro virologické studie (BKV, JCV, CMV, EBV) a imunofluorescenční barvení iliakálních lymfatických uzlin (získané v době transplantace) a protokolové biopsie . Protilátky specifické pro dárce budou detekovány pomocí testů lymfocytotoxicity, HLA třídy I a II ELISA a testů Luminex. Specificita dárce bude potvrzena křížovým testem T- a B-buněk s dárcovskými buňkami. Regulační IgG (imunoglobulin G) a IgA (imunoglobulin A) anti-Fab autoprotilátky, neopterin a sCD30 budou hodnoceny pomocí ELISA.

Očekávané výsledky. Očekáváme, že indukce Rtx bude mít vliv na imunologické parametry výsledku štěpu, jako je tvorba potransplantačních protilátek HLA de-novo. Tato pilotní studie může umožnit zlepšení dlouhodobého výsledku transplantace ledviny u příjemců s imunologickými rizikovými parametry díky imunosupresivní léčbě přizpůsobené pacientovi. U transplantace ledvin ABOi může tato studie zabránit současným 15% mírám výpadků tím, že umožní optimalizované dávkování Rtx na základě zamýšlené analýzy odezvy na dávku (analýza podskupiny B buněk v krvi a lymfatických uzlinách odvádějících štěp). Kromě toho tato studie umožní odhad rizika podávání Rtx s ohledem na replikaci CMV a polyomaviru a může poskytnout vodítka týkající se ochrany před replikací EBV a potransplantačním lymfoproliferativním onemocněním. Posledně uvedený bod má velký klinický význam u pacientů se zvýšeným rizikem PTLD (posttransplantační lymfoproliferativní onemocnění), jako jsou EBV negativní příjemci EBV pozitivních štěpů.