Impatto dell'induzione di Rituximab (RTx) e della donazione vivente sull'immunoregolazione e sul controllo del virus nel trapianto renale

Obbiettivo. Il trapianto renale LD incompatibile con gruppo sanguigno (ABOi) rappresenta una modalità di trattamento riconosciuta in Germania. In questo contesto, considerazioni etiche consentono uno studio dettagliato degli effetti immunologici e virologici a breve e lungo termine della terapia di induzione Rtx, comprese le biopsie sequenziali del protocollo. Nel progetto proposto eseguiremo analisi su sangue periferico, linfonodi iliaci e biopsie protocollari. Le biopsie del protocollo vengono regolarmente ottenute 3 e 12 mesi dopo il trapianto presso le Università di Giessen e Friburgo. In questo studio pilota aperto prospettico, i parametri immunologici dell'esito del trapianto e il controllo della replicazione di poliomavirus, EBV e CMV saranno confrontati tra i riceventi di trapianto renale ABOi LD trattati con RTx (n = 25-30, gruppo 1) e LD renale compatibile con gruppo sanguigno riceventi trapiantati senza induzione Rtx (n=25-30, gruppo 2) ma altrimenti trattamento immunosoppressivo comparabile (MPS e Tacr, passaggio a Tacr-MR (rilascio modificato) entro 2 settimane dopo il trapianto; follow-up di 5 anni). Le stesse analisi saranno effettuate nei pazienti con trapianto renale DD trattati con Tacr (passaggio a Tacr-ME) e MPS (n=25-30, gruppo 3). Questo disegno di studio consente di analizzare l'impatto della donazione vivente sull'immunoregolazione e sul controllo del virus (gruppi 2 contro 3).

Sfondo. Vi sono prove crescenti che i meccanismi umorali svolgono un ruolo importante nella disfunzione cronica dell'allotrapianto, che è stata dimostrata essere significativamente associata alla formazione de-novo di anticorpi specifici del donatore contro gli antigeni leucocitari umani (HLA). Tuttavia, le cellule B sembrano agire non solo nelle risposte umorali contro l'innesto, ma possono svolgere un ruolo significativo nelle risposte antidonatore mediate dalle cellule T a causa del loro ruolo di efficaci cellule presentanti l'antigene. Ciò è ulteriormente suggerito dal fatto che Rtx è efficace principalmente nelle malattie mediate dalle cellule T come l'artrite reumatoide o la sclerosi multipla.

Ipotesi/obiettivi specifici. Ipotizziamo che l'induzione di Rtx possa alterare l'immunoregolazione a breve e lungo termine dopo il trapianto renale con il potenziale per migliorare l'esito a lungo termine. Gli effetti protettivi dell'innesto dell'induzione di Rtx possono essere forniti dalla deplezione delle cellule B e dai conseguenti effetti sulle risposte umorali e delle cellule T, e anche dalle risposte alterate dopo il ripopolamento delle cellule B. Verranno analizzati i possibili effetti negativi di Rtx sul controllo del poliomavirus e del CMV, nonché gli effetti protettivi sulla replicazione dell'EBV, sulla gammopatia monoclonale de-novo e sulla regolazione dei fattori di crescita del linfoma (interleuchine 6 e 10 (IL-6, IL-10)). Inoltre, l'analisi del sottogruppo di cellule B nel sangue periferico e l'impatto probabilmente associato di Rtx sulla deplezione delle cellule B nei linfonodi iliaci che drenano l'innesto possono consentirci di stabilire un dosaggio Rtx ottimizzato e quindi consentire il successo del trapianto renale ABOi senza il 15% di abbandoni attualmente osservato .

Risultati preliminari. Abbiamo condotto studi clinici che mostrano il potere predittivo di parametri immunitari come autoanticorpi regolatori anti-Fab, sCD30, CD4 (cluster di differenziazione 4) attività di supporto e cellule CD4 IL-4 (interleuchina 4) e IL-10 (interleuchina 10) risposte sull'esito del trapianto. Verrà analizzato l'effetto a lungo termine della terapia di induzione Rtx e della donazione da vivente su questi parametri.

In precedenza, abbiamo scoperto che i pazienti a rischio di nefropatia da poliomavirus possono essere riconosciuti precocemente dopo il trapianto mediante valutazione sequenziale della catena della trascrittasi inversa della polimerasi (rt-PCR) della replicazione del poliomavirus nelle urine. Il test sequenziale rt-PCR della replicazione del poliomavirus nelle urine e nel plasma sarà utilizzato per analizzare gli effetti dell'induzione di Rtx sul controllo del poliomavirus.

Metodi proposti. I parametri immunitari saranno analizzati principalmente prima del trapianto, 3 mesi e 1, 2 e 5 anni dopo il trapianto. Citometria a flusso (incluse cellule T regolatorie, sottoinsiemi di cellule B, espressione di recettori delle citochine, molecole costimolatorie e di adesione), coculture allogeniche stimolate da mitogeni, analisi della placca di proteina A (risposte delle cellule B, attività CD4 helper), analisi delle citochine intracellulari di CD4+ e Verranno utilizzate cellule T CD8+ (cluster di differenziazione 8), cellule B e monociti, rt-PCR per studi virologici (BKV, JCV, CMV, EBV) e colorazione immunofluorescente dei linfonodi iliaci (ottenuta al momento del trapianto) e biopsie protocollari . Gli anticorpi specifici del donatore saranno rilevati mediante linfocitotossicità, HLA classe I e II ELISA e saggi Luminex. La specificità del donatore sarà confermata dal crossmatch delle cellule T e B con le cellule del donatore. Gli autoanticorpi regolatori IgG (immunoglobulina G) e IgA (immunoglobulina A) anti-Fab, neopterina e sCD30 saranno valutati mediante ELISA.

Risultati aspettati. Ci aspettiamo che l'induzione di Rtx mostri un impatto sui parametri immunologici dell'esito del trapianto, come la formazione de-novo di anticorpi HLA antidonatore post-trapianto. Questo studio pilota può consentire un migliore risultato del trapianto di rene a lungo termine nei riceventi con parametri di rischio immunologico in virtù della terapia immunosoppressiva su misura per il paziente. Nel trapianto renale ABOi, questo studio può prevenire gli attuali tassi di abbandono del 15% consentendo un dosaggio Rtx ottimizzato basato sull'analisi della risposta alla dose prevista (analisi del sottogruppo di cellule B nel sangue e nei linfonodi drenanti dell'innesto). Inoltre, questo studio consentirà la stima del rischio della somministrazione di Rtx rispetto alla replicazione di CMV e poliomavirus e potrebbe fornire indizi sulla protezione contro la replicazione di EBV e la malattia linfoproliferativa post-trapianto. Quest'ultimo punto è di grande importanza clinica nei pazienti con un aumentato rischio di PTLD (malattia linfoproliferativa post-trapianto) come i destinatari EBV negativi di innesti EBV positivi.