Impacto da Indução com Rituximabe (RTx) e Doação Viva na Imunoregulação e Controle de Vírus no Transplante Renal

Objetivo. O transplante renal de LD incompatível com grupos sanguíneos (ABOi) representa uma modalidade de tratamento reconhecida na Alemanha. Nesse cenário, considerações éticas permitem um estudo detalhado dos efeitos imunológicos e virológicos de curto e longo prazo da terapia de indução Rtx, incluindo biópsias de protocolo sequencial. No projeto proposto realizaremos análises de sangue periférico, linfonodos ilíacos e biópsias protocolares. Biópsias de protocolo são obtidas rotineiramente 3 e 12 meses após o transplante nas Universidades de Giessen e Freiburg. Neste estudo piloto prospectivo aberto, os parâmetros imunológicos do resultado do enxerto e o controle da replicação do poliomavírus, EBV e CMV serão comparados entre receptores de transplante renal ABOi LD tratados com RTx (n = 25-30, grupo 1) e LD renal compatível com grupo sanguíneo receptores de transplante sem indução Rtx (n = 25-30, grupo 2), mas tratamento imunossupressor comparável (MPS e Tacr, mude para Tacr-MR (liberação modificada) dentro de 2 semanas após o transplante; acompanhamento de 5 anos). As mesmas análises serão feitas em receptores de transplante renal DD tratados com Tacr (mudança para Tacr-ME) e MPS (n=25-30, grupo 3). Este desenho de estudo permite analisar o impacto da doação em vida na imunorregulação e controle do vírus (grupos 2 versus 3).

Fundo. Há evidências crescentes de que os mecanismos humorais desempenham um papel importante na disfunção crônica do aloenxerto, que se mostrou significativamente associada à formação de novo de anticorpos específicos do doador contra antígenos leucocitários humanos (HLA). No entanto, as células B parecem atuar não apenas em respostas humorais contra o enxerto, mas podem desempenhar um papel significativo nas respostas antidoadoras mediadas por células T devido ao seu papel como células apresentadoras de antígeno eficazes. Isso é ainda sugerido pelo fato de Rtx ser eficaz principalmente em doenças mediadas por células T, como artrite reumatóide ou esclerose múltipla.

Hipóteses/objectivos específicos. Nossa hipótese é que a indução de Rtx pode alterar a imunorregulação a curto e longo prazo após o transplante renal com o potencial de melhorar o resultado a longo prazo. Os efeitos protetores do enxerto da indução de Rtx podem ser fornecidos pela depleção de células B e os efeitos resultantes nas respostas humoral e das células T, e também por respostas alteradas após a repopulação das células B. Possíveis efeitos negativos do Rtx no controle de poliomavírus e CMV, bem como efeitos protetores na replicação do EBV, gamopatia monoclonal de-novo e regulação de fatores de crescimento de linfoma (interleucinas 6 e 10 (IL-6, IL-10)) serão analisados. Além disso, a análise do subconjunto de células B no sangue periférico e o impacto provavelmente associado de Rtx na depleção de células B em linfonodos ilíacos de drenagem de enxertos pode nos permitir estabelecer uma dosagem de Rtx otimizada e, assim, permitir o sucesso do transplante renal ABOi sem os 15% de desistências atualmente observados .

Resultados preliminares. Realizamos estudos clínicos mostrando o poder preditivo de parâmetros imunológicos, como autoanticorpos reguladores anti-Fab, sCD30, atividade auxiliar de CD4 (cluster de diferenciação 4) e células CD4 IL-4 (interleucina 4) e IL-10 (interleucina 10) respostas sobre o resultado do enxerto. O efeito a longo prazo da terapia de indução Rtx e da doação em vida sobre esses parâmetros será analisado.

Anteriormente, descobrimos que os pacientes com risco de nefropatia por poliomavírus podem ser reconhecidos logo após o transplante pela avaliação sequencial da cadeia da polimerase da transcriptase reversa (rt-PCR) da replicação do poliomavírus na urina. O teste sequencial de rt-PCR da replicação do poliomavírus na urina e no plasma será usado para analisar os efeitos da indução de Rtx no controle do poliomavírus.

Métodos propostos. Parâmetros imunológicos serão analisados ​​principalmente pré-transplante, 3 meses e 1, 2 e 5 anos pós-transplante. Citometria de fluxo (incluindo células T reguladoras, subconjuntos de células B, expressão de receptores de citocinas, moléculas coestimuladoras e de adesão), coculturas alogênicas estimuladas por mitógenos, ensaio de placa de proteína A (respostas de células B, atividade auxiliar de CD4), análise intracelular de citocinas de CD4+ e Serão utilizadas células T CD8+ (cluster de diferenciação 8), células B e monócitos, rt-PCR para estudos virológicos (BKV, JCV, CMV, EBV) e coloração imunofluorescente de linfonodos ilíacos (obtidos no momento do transplante) e biópsias protocolares . Os anticorpos específicos do doador serão detectados por meio de ensaios de linfocitotoxicidade, HLA classe I e II ELISA e Luminex. A especificidade do doador será confirmada por prova cruzada de células T e B com células do doador. Autoanticorpos reguladores IgG (imunoglobulina G) e IgA (imunoglobulina A) anti-Fab, neopterina e sCD30 serão avaliados por ELISA.

Resultados esperados. Esperamos que a indução de Rtx mostre um impacto nos parâmetros imunológicos do resultado do enxerto, como a formação de anticorpos HLA antidoador pós-transplante de novo. Este estudo piloto pode permitir um melhor resultado do enxerto renal a longo prazo em receptores com parâmetros de risco imunológico em virtude da terapia imunossupressora adaptada ao paciente. No transplante renal ABOi, este estudo pode prevenir as atuais taxas de abandono de 15%, permitindo uma dosagem de Rtx otimizada com base na análise de resposta à dose pretendida (análise de subconjunto de células B no sangue e nos gânglios linfáticos de drenagem do enxerto). Além disso, este estudo permitirá estimar o risco da administração de Rtx em relação à replicação do CMV e do poliomavírus e pode fornecer pistas sobre a proteção contra a replicação do EBV e a doença linfoproliferativa pós-transplante. O último ponto é de grande importância clínica em pacientes com risco aumentado de PTLD (doença linfoproliferativa pós-transplante), como receptores EBV negativos de enxertos positivos para EBV.