Antigeenispesifisten lymfosyyttien vaihtuvuus 17D keltakuumerokotteella immunisoinnin jälkeen

Yleensä T-soluvasteet virusinfektioihin tapahtuvat kolmessa erillisessä vaiheessa: laajeneminen, supistuminen ja muisti. Laajentumisen aikana antigeenispesifiset CD8+-T-solut lisääntyvät ja lisääntyvät ja saavat kyvyn tappaa viruksen infektoimia soluja, eli tulla "effektoreiksi". Kun virus on puhdistettu, 90-95 % effektoreista kuolee. Jäljellä olevien solujen pieni joukko erilaistuu vähitellen muistisoluiksi ja tarjoaa elinikäisen suojan. Solunjakautumisen nopeus on erilainen efektorien muodostumisessa ja muistisolujen ylläpidossa. Nämä käsitteet on johdettu pääasiassa hiiritutkimuksista. Ihmisen CD8+ T-solujen vaihtuvuutta ei täysin ymmärretä, koska ihmistutkimuksiin sopivia työkaluja ja tekniikoita ei ole.

Tässä protokollassa tutkijat haluavat ymmärtää efektori-CD8+ T-solujen eliniän ja hajoamiskäyrän sekä muisti-CD8+ (CD28+/--alajoukot) T-solujen homeostaattisen vaihtuvuuden nopeuden 17D YFV-immunisaation jälkeen käyttäen innovatiivista menetelmää, jonka on kehittänyt tohtori Marc Hellersteinin ryhmä (Kalifornian yliopistossa Berkeleyssä) DNA:n replikaation ja solujen lisääntymisen mittaamiseksi ihmisissä käyttämällä luonnossa esiintyvää stabiilia isotooppia nimeltä deuterium (2H). Tätä tekniikkaa on käytetty useiden ihmissolutyyppien vaihtuvuuden seuraamiseen in vivo. Tämän tutkimuksen tutkijat aikovat käyttää 2H-leimausta YFV-spesifisten CD8+ T-solujen jäljittämiseen ihmisrokotetuissa (vain HLA-A2-positiiviset osallistujat). T-soluepitoopin (A2-NS4B214), joka on ihmisen YFV-spesifisen CD8+-T-soluvasteen pääkomponentti, saatavuus mahdollistaa virusspesifisten CD8+-T-solujen pitkittäisanalyysin. Tämän tutkimuksen ainutlaatuinen piirre on, että se mahdollistaa YFV-spesifisten CD8+ T-solujen erilaistumisen seurannan ihmisissä. Siten tutkijat voivat voittaa luontaiset rajoitukset, jotka johtuvat heterogeenisyydestä poikkileikkaustutkimuksissa, joihin liittyy bulkki-CD8+ T-soluja.

Suunnittelemme 50 tervettä aikuista vapaaehtoista (18–45-vuotiaat) hankkeisiin 1 ja 2 tutkimaan muisti-CD8 T-soluvasteita. Kaikki koehenkilöt saavat FDA:n hyväksymän YFV-17D-rokotteen (FDA:n hyväksymällä annoksella ja antoreitillä). CD28:n ilmentyminen määritetään, jotta nähdään, onko se kytketty YFV-spesifisten muisti-CD8 T-solujen synnyttämiseen ja/tai ylläpitoon. Fenotyyppisiä eroja CD28+- ja CD28-_YFV-spesifisten CD8 T-solujen välillä tutkitaan pitkäikäisyyden erojen määrittämiseksi. CD28+- ja CD28-YFV-spesifisten CD8-T-solujen geeniekspressioprofiilit määritetään. IL-7:n ja IL-15:n vaikutusta YFV-spesifisten CD8 T-solujen eloonjäämiseen tutkitaan. Nämä tiedot saadaan YFV-spesifisistä soluista, jotka on eristetty päivänä 0, 14, 28 ja 3-6 kuukautta, 1-2 vuotta ja >5 vuotta rokotuksen jälkeen.

Tutkimus tehdään Hope Clinic of Emory Vaccine Centerissä. Tutkimukseen rekrytoidaan henkilöt, jotka suunnittelevat matkustamista keltakuumeen endeemisille alueille ja jotka tarvitsevat rokotteen matkustustarkoituksiin, sekä henkilöt, jotka eivät matkusta. Mahdolliset osallistujat voidaan rekrytoida Emory Travel Well Clinicistä tai CDC:n työntekijöiden terveydentilasta tai Emory Universityn kampukselta tai Atlantan metron väestöstä käyttämällä radio- ja painettuja mainoksia, sähköpostiviestejä, Internet-julkaisuja, lentolehtisiä ja julisteita. Emory Universityn IRB-hyväksyntä hankitaan ennen tutkimuksen aloittamista.

Tulee seulontakäynti, jossa selvitetään kelpoisuus tutkimukseen. Allekirjoitetut tietoon perustuvat suostumuslomakkeet hankitaan ennen tutkimustoimenpiteiden aloittamista. Osallistumis- ja poissulkemiskriteerit sekä lyhyt historia ja fyysinen tarkastus suoritetaan. Lisäksi osallistujia pyydetään suorittamaan flebotomia HLA-tyypin määrittämiseksi. Osallistujia, jotka ovat positiivisia HLA A202 -alleelin suhteen, pyydetään osallistumaan tähän tutkimukseen. On arvioitu, että 25 % Yhdysvaltain valkoihoisesta väestöstä on positiivinen tälle alleelille. Osallistujille, joiden testitulos on negatiivinen tälle alleelille, tarjotaan muita rokotekokeita, joita tehdään Emory Hope -klinikalla, ja heidän osallistumisensa tähän protokollaan päättyy.

Ennen keltakuumerokotteen antamista määritetään rokotteeseen liittyvien haittavaikutusten riski-hyötysuhde verrattuna keltakuumerokotteen riskiin. Tutkimukseen otetaan mukaan terveet henkilöt, joita ei ole aiemmin rokotettu YFV-rokotteella. Rekrytoidaan sekä nais- että miespuolisia vapaaehtoisia.

Suunnittelemme mukaan 50 tervettä vapaaehtoista iältään 18-45 vuotta. Saavuttaaksemme nämä ilmoittautumistavoitteet, meidän on ehkä seulottava 200 aihetta. Kaikki koehenkilöt saavat FDA:n hyväksymän YFV-17D-rokotteen (FDA:n hyväksymällä annoksella ja antoreitillä) kerran tutkimuskäynnin päivänä 0. Verinäytteet otetaan vapaaehtoisilta päivänä 0 ja aikataulun mukaisina ajankohtina rokotuksen jälkeen. Otetun veren kokonaismäärä ei ylitä Punaisen Ristin 473 ml:n rajaa 56 päivässä.

Tutkimukseen osallistuvien vapaaehtoisten päivittäinen 2H2O-saanti on 100–150 ml, ja tavoitteena on ylläpitää 1,5–2 %:n kehon vesipitoisuutta (olettaen, että kehon kokonaisvesikierto on noin 3,5 litraa päivässä terveillä, liikkuvilla koehenkilöillä). Plasma- ja sylkinäytteet otetaan 2H2O-antoprotokollan aikana kehon 2H2O-rikastumisen mittaamiseksi.