Obrót limfocytów specyficznych dla antygenu po immunizacji szczepionką przeciw żółtej gorączce 17D

Ogólnie rzecz biorąc, odpowiedzi limfocytów T na infekcje wirusowe przebiegają w trzech odrębnych etapach: ekspansji, skurczu i pamięci. Podczas namnażania specyficzne dla antygenu limfocyty T CD8+ namnażają się, zwiększając liczbę, jak również uzyskując zdolność zabijania komórek zakażonych wirusem, tj. stają się „efektorami”. Po usunięciu wirusa 90-95% efektorów umiera. Niewielka pula pozostałych komórek różnicuje się stopniowo, stając się komórkami pamięci i zapewniając ochronę na całe życie. Szybkość podziału komórek jest różna w generowaniu efektorów i utrzymaniu komórek pamięci. Koncepcje te wywodzą się głównie z badań na myszach. Obroty ludzkich limfocytów T CD8+ nie są w pełni poznane z powodu braku odpowiednich narzędzi i technik nadających się do badań na ludziach.

W tym protokole naukowcy chcą poznać krzywą życia i rozpadu efektorowych limfocytów T CD8+ oraz szybkość homeostazy limfocytów T pamięci CD8+ (podzbiory CD28+/-) po immunizacji 17D YFV przy użyciu innowacyjnej metody opracowanej przez dr Marca Hellersteina (na Uniwersytecie Kalifornijskim w Berkeley) do pomiaru replikacji DNA i proliferacji komórek u ludzi przy użyciu naturalnie występującego stabilnego izotopu zwanego deuterem (2H). Ta technika została wykorzystana do śledzenia obrotu wielu typów komórek ludzkich in vivo. Naukowcy biorący udział w tym badaniu planują zastosować znakowanie 2H do śledzenia specyficznych dla YFV komórek T CD8+ u zaszczepionych ludzi (tylko uczestnicy z dodatnim wynikiem HLA-A2). Dostępność epitopu komórki T (A2-NS4B214), głównego składnika odpowiedzi komórek T CD8+ swoistej dla ludzkiego YFV, umożliwia analizę podłużną komórek T CD8+ swoistych dla wirusa. Unikalną cechą tego badania jest to, że pozwala ono na śledzenie różnicowania komórek T CD8+ specyficznych dla YFV u ludzi. W ten sposób naukowcy mogą przezwyciężyć nieodłączne ograniczenia wynikające z heterogeniczności w badaniach przekrojowych, które obejmują masowe limfocyty T CD8+.

Planujemy zapisać 50 zdrowych, dorosłych ochotników (18-45 lat) do Projektów 1 i 2 w celu zbadania odpowiedzi limfocytów T CD8 pamięci. Wszyscy pacjenci otrzymają zatwierdzoną przez FDA szczepionkę YFV-17D (w zatwierdzonej przez FDA dawce i drodze podania). Ekspresja CD28 zostanie określona, ​​aby zobaczyć, czy jest sprzężona z wytwarzaniem i/lub utrzymywaniem limfocytów T CD8 pamięci specyficznych dla YFV. Różnice fenotypowe między limfocytami T CD8 specyficznymi dla CD28+ i CD28-_YFV będą badane w celu określenia różnic w długowieczności. Określone zostaną profile ekspresji genów komórek T CD8 specyficznych dla CD28+ i CD28 YFV. Zbadany zostanie wpływ IL-7 i IL-15 na przeżywalność limfocytów T CD8 swoistych dla YFV. Informacje te zostaną uzyskane z komórek specyficznych dla YFV wyizolowanych w dniu 0, 14, 28 i 3 do 6 miesięcy, 1-2 lata i > 5 lat po szczepieniu.

Badanie zostanie przeprowadzone w Hope Clinic of Emory Vaccine Center. Do badania zostaną zwerbowane osoby, które planują podróż do obszarów endemicznych żółtej febry i które wymagają szczepionki w celach podróżniczych, a także osoby niepodróżujące. Potencjalni uczestnicy mogą być rekrutowani z Emory Travel Well Clinic lub pracowników CDC ds. zdrowia lub kampusu Emory University lub z ogólnej populacji metra Atlanta za pomocą reklam radiowych i drukowanych, wiadomości elektronicznych, postów internetowych, ulotek i plakatów. Zgoda IRB z Emory University zostanie uzyskana przed rozpoczęciem badania.

Odbędzie się wizyta przesiewowa w celu ustalenia, czy kwalifikujesz się do badania. Podpisane formularze świadomej zgody zostaną uzyskane przed rozpoczęciem procedur badawczych. Zostaną przeprowadzone kryteria włączenia i wyłączenia oraz krótki wywiad i badanie fizykalne. Ponadto uczestnicy zostaną poproszeni o wykonanie flebotomii w celu określenia typu HLA. Uczestnicy z dodatnim wynikiem allelu HLA A202 zostaną poproszeni o wzięcie udziału w tym badaniu. Szacuje się, że 25% populacji kaukaskiej w USA będzie miało pozytywny wynik na obecność tego allelu. Uczestnikom, którzy uzyskają negatywny wynik testu na obecność tego allelu, zostaną zaproponowane inne badania szczepionek, które są prowadzone w klinice Emory Hope, a ich udział w tym protokole zostanie zakończony.

Przed podaniem szczepionki przeciw żółtej febrze określa się stosunek korzyści do ryzyka działań niepożądanych związanych ze szczepionką w stosunku do ryzyka zachorowania na żółtą febrę. Do badania zostaną włączone osoby zdrowe, które nie były wcześniej szczepione szczepionką YFV. Rekrutowani będą zarówno wolontariusze płci męskiej, jak i żeńskiej.

Planujemy zapisać 50 zdrowych ochotników w wieku od 18 do 45 lat. Aby osiągnąć te cele rekrutacyjne, być może będziemy musieli przebadać 200 osób. Wszyscy uczestnicy otrzymają zatwierdzoną przez FDA szczepionkę YFV-17D (w zatwierdzonej przez FDA dawce i drodze podania) raz w dniu 0 wizyty badawczej. Próbki krwi będą pobierane od ochotników w dniu 0 oraz w zaplanowanych punktach czasowych po szczepieniu. Całkowita objętość pobranej krwi nie przekroczy limitu Czerwonego Krzyża wynoszącego 473 ml w ciągu 56 dni.

Ochotnicy biorący udział w badaniu będą otrzymywać 100-150 ml dziennie 2H2O, w celu utrzymania wzbogacenia organizmu w wodę na poziomie 1,5-2% (przy założeniu, że całkowity obrót wody w organizmie wynosi ~3,5 litra dziennie u zdrowych, chodzących osób). Próbki osocza i śliny będą pobierane podczas protokołu podawania 2H2O w celu pomiaru wzbogacenia organizmu w 2H2O.