Обмен антигенспецифических лимфоцитов после иммунизации вакциной против желтой лихорадки 17D

В общем, Т-клеточные ответы на вирусные инфекции происходят в три отдельных этапа: расширение, сокращение и память. Во время экспансии антигенспецифические CD8+ Т-клетки пролиферируют, увеличивая количество, а также приобретают способность убивать инфицированные вирусом клетки, т. е. становятся «эффекторами». После уничтожения вируса погибает 90-95% эффекторов. Небольшой пул оставшихся клеток постепенно дифференцируется, превращаясь в клетки памяти и обеспечивая пожизненную защиту. Скорость клеточного деления отличается образованием эффекторов и сохранением клеток памяти. Эти концепции были в основном получены из исследований на мышах. Оборот человеческих CD8+ Т-клеток до конца не изучен из-за отсутствия соответствующих инструментов и методов, подходящих для исследований на людях.

В этом протоколе исследователи хотят понять продолжительность жизни и кривую распада эффекторных CD8+ Т-клеток, а также скорость гомеостатического оборота памяти CD8+ (CD28+/- подмножества) Т-клеток после иммунизации 17D YFV с использованием инновационного метода, разработанного доктором Марком Хеллерштейном. группа (в Калифорнийском университете, Беркли) для измерения репликации ДНК и пролиферации клеток у людей с использованием встречающегося в природе стабильного изотопа под названием дейтерий (2H). Этот метод использовался для отслеживания оборота ряда типов клеток человека in vivo. Исследователи этого исследования планируют использовать 2H-мечение для отслеживания YFV-специфических CD8+ T-клеток у вакцинированных людей (только участники с положительным результатом на HLA-A2). Наличие Т-клеточного эпитопа (A2-NS4B214), основного компонента специфического ответа Т-клеток CD8+, специфичного для YFV человека, позволяет проводить продольный анализ специфичных к вирусу CD8+ Т-клеток. Уникальной особенностью этого исследования является то, что оно позволяет отслеживать дифференцировку YFV-специфических CD8+ Т-клеток у людей. Таким образом, исследователи могут преодолеть присущие им ограничения из-за неоднородности в поперечных исследованиях, в которых задействована масса Т-клеток CD8+.

Мы планируем привлечь 50 здоровых взрослых добровольцев (в возрасте от 18 до 45 лет) для участия в проектах 1 и 2 для изучения ответов Т-клеток памяти CD8. Все субъекты получат одобренную FDA вакцину YFV-17D (в дозе и способе введения, одобренных FDA). Будет определена экспрессия CD28, чтобы увидеть, связана ли она с образованием и/или поддержанием YFV-специфических Т-клеток памяти CD8. Будут изучены фенотипические различия между CD28+ и CD28-_YFV-специфическими Т-клетками CD8 для определения различий в продолжительности жизни. Будут определены профили экспрессии генов CD28+ и CD28 YFV-специфических Т-клеток CD8. Будет изучено влияние IL-7 и IL-15 на выживаемость YFV-специфических CD8 T-клеток. Эта информация будет получена из клеток, специфичных для YFV, выделенных на 0, 14, 28 день и от 3 до 6 месяцев, через 1-2 года и >5 лет после вакцинации.

Исследование будет проводиться в клинике Хоуп Центра вакцин Эмори. К участию в исследовании будут привлечены лица, планирующие поездку в эндемичные по желтой лихорадке районы и которым требуется вакцина для поездок, а также лица, не совершающие поездок. Потенциальные участники могут быть набраны из клиники Emory Travel Well Clinic, медицинского центра CDC, кампуса Университета Эмори или населения в целом в метро Атланты с использованием рекламы на радио и в печати, электронных рассылок, публикаций в Интернете, листовок и плакатов. Одобрение IRB от Университета Эмори будет получено до начала исследования.

Будет проведен скрининговый визит для определения права на участие в исследовании. Подписанные формы информированного согласия будут получены до начала процедур исследования. Критерии включения и исключения, а также краткий анамнез и физическое обследование будут выполнены. Кроме того, участникам будет предложено пройти флеботомию для определения типа HLA. Участникам с положительным результатом на аллель HLA A202 будет предложено принять участие в этом исследовании. Подсчитано, что 25% европейского населения США будут положительными по этому аллелю. Участникам с отрицательным результатом теста на этот аллель будут предложены другие испытания вакцины, которые проводятся в клинике Эмори Хоуп, и их участие в этом протоколе будет прекращено.

Перед введением вакцины против желтой лихорадки определяют соотношение риска и пользы побочных эффектов, связанных с вакциной, по сравнению с риском заражения желтой лихорадкой. В исследование будут включены здоровые люди, которые ранее не были вакцинированы вакциной против YFV. Будут набраны как женщины, так и мужчины-добровольцы.

Мы планируем набрать 50 здоровых добровольцев в возрасте от 18 до 45 лет. Чтобы достичь этих целей по зачислению, нам может потребоваться проверить 200 субъектов. Все субъекты будут получать одобренную FDA вакцину YFV-17D (в дозе и способе введения, утвержденных FDA) один раз в день 0 исследовательского визита. Образцы крови будут получены от добровольцев в день 0 и в запланированные моменты времени после вакцинации. Общий объем взятой крови не превысит лимит Красного Креста в 473 мл за 56 дней.

Добровольцы исследования будут получать 100-150 мл ежедневного потребления 2H2O с целью поддержания обогащения организма водой на 1,5-2% (при условии, что общий оборот воды в организме составляет ~ 3,5 литра в день у здоровых, амбулаторных субъектов). Образцы плазмы и слюны будут получены во время протокола введения 2H2O для измерения обогащения организма 2H2O.