Turnover di linfociti specifici per l'antigene dopo l'immunizzazione con il vaccino contro la febbre gialla 17D

In generale, le risposte delle cellule T alle infezioni virali si verificano in tre fasi distinte: espansione, contrazione e memoria. Durante l'espansione, le cellule T CD8+ antigene-specifiche proliferano per aumentare di numero e acquisire la capacità di uccidere le cellule infettate dal virus, cioè diventare "effettori". Una volta eliminato il virus, il 90-95% degli effettori muore. Il piccolo pool di cellule rimanenti si differenzia gradualmente per diventare cellule di memoria e fornire protezione per tutta la vita. Il tasso di divisione cellulare è distinto nella generazione di effettori e nel mantenimento delle cellule di memoria. Questi concetti sono stati derivati ​​principalmente da studi sui topi. Il turnover delle cellule T CD8+ umane non è completamente compreso a causa della mancanza di strumenti e tecniche adeguati adatti agli studi sull'uomo.

In questo protocollo, i ricercatori vogliono comprendere la durata della vita e la curva di decadimento delle cellule T CD8+ effettrici e il tasso di turnover omeostatico delle cellule T memoria CD8+ (sottoinsiemi CD28+/-) dopo l'immunizzazione 17D YFV utilizzando un metodo innovativo sviluppato dal Dr. Marc Hellerstein gruppo (presso l'Università della California, Berkeley) per misurare la replicazione del DNA e la proliferazione cellulare negli esseri umani utilizzando un isotopo stabile naturale chiamato deuterio (2H). Questa tecnica è stata utilizzata per monitorare il turnover di un certo numero di tipi di cellule umane in vivo. I ricercatori di questo studio prevedono di utilizzare l'etichettatura 2H per tracciare le cellule T CD8 + specifiche per YFV nei vaccinati umani (solo partecipanti HLA-A2 positivi). La disponibilità di un epitopo delle cellule T (A2-NS4B214), un componente importante della risposta delle cellule T CD8+ specifiche per YFV umano, consente l'analisi longitudinale delle cellule T CD8+ specifiche del virus. La caratteristica unica di questo studio è che consente di tracciare la differenziazione delle cellule T CD8+ specifiche per YFV nell'uomo. Pertanto, i ricercatori possono superare i limiti intrinseci dovuti all'eterogeneità negli studi trasversali che coinvolgono cellule T CD8+ in massa.

Abbiamo in programma di arruolare 50 volontari adulti sani (18-45 anni) per i Progetti 1 e 2 per studiare le risposte delle cellule T CD8 della memoria. Tutti i soggetti riceveranno il vaccino YFV-17D approvato dalla FDA (alla dose e alla via di somministrazione approvate dalla FDA). L'espressione di CD28 sarà determinata per vedere se è accoppiata alla generazione e/o al mantenimento di cellule T CD8 di memoria specifiche per YFV. Le differenze fenotipiche tra cellule T CD28+ e CD28-_YFV specifiche saranno studiate per determinare le differenze nella longevità. Saranno determinati i profili di espressione genica delle cellule T CD8+ e CD28 YFV-specifiche. Sarà studiata l'influenza di IL-7 e IL-15 sulla sopravvivenza delle cellule T CD8 YFV-specifiche. Queste informazioni saranno ottenute da cellule specifiche di YFV isolate al giorno 0, 14, 28 e da 3 a 6 mesi, 1-2 anni e >5 anni dopo la vaccinazione.

Lo studio sarà condotto presso la Hope Clinic dell'Emory Vaccine Center. Saranno reclutati nello studio individui che stanno pianificando di viaggiare in aree endemiche della febbre gialla e che richiedono il vaccino per motivi di viaggio, nonché non viaggiatori. I potenziali partecipanti possono essere reclutati dalla Emory Travel Well Clinic o dalla salute dei dipendenti del CDC o dal campus della Emory University o dalla popolazione generale della metropolitana di Atlanta utilizzando pubblicità radiofoniche e stampate, posta elettronica, messaggi su Internet, volantini e poster. L'approvazione dell'IRB da parte della Emory University sarà ottenuta prima dell'inizio dello studio.

Ci sarà una visita di screening per determinare l'ammissibilità allo studio. I moduli di consenso informato firmati saranno ottenuti prima dell'inizio delle procedure di studio. Verranno eseguiti i criteri di inclusione ed esclusione e una breve storia e un esame fisico. Inoltre, ai partecipanti verrà chiesto di sottoporsi a flebotomia per determinare il tipo di HLA. Ai partecipanti positivi per l'allele HLA A202 verrà chiesto di partecipare a questo studio. Si stima che il 25% della popolazione caucasica statunitense sarà positiva per questo allele. Ai partecipanti che risultano negativi per questo allele verranno offerti altri studi sui vaccini che vengono condotti presso la clinica Emory Hope e la loro partecipazione a questo protocollo terminerà.

Prima della somministrazione del vaccino contro la febbre gialla, viene determinato il rapporto rischio-beneficio degli eventi avversi correlati al vaccino rispetto al rischio di contrarre la febbre gialla. Saranno inclusi nello studio individui sani che non sono stati precedentemente vaccinati con il vaccino YFV. Saranno reclutati volontari sia donne che uomini.

Abbiamo in programma di arruolare 50 volontari sani di età compresa tra i 18 ei 45 anni. Per raggiungere questi obiettivi di iscrizione, potremmo aver bisogno di selezionare 200 soggetti. Tutti i soggetti riceveranno il vaccino YFV-17D approvato dalla FDA (alla dose e alla via di somministrazione approvate dalla FDA) una volta il giorno 0 della visita dello studio. I campioni di sangue saranno ottenuti dai volontari il giorno 0 e nei momenti programmati dopo la vaccinazione. Il volume totale di sangue prelevato non supererà il limite della Croce Rossa di 473 ml in 56 giorni.

I volontari dello studio saranno mantenuti con un'assunzione giornaliera di 100 ml - 150 ml di 2H2O, con l'obiettivo di mantenere l'arricchimento idrico corporeo dell'1,5-2% (presupponendo un ricambio idrico corporeo totale di ~ 3,5 litri al giorno in soggetti sani e deambulanti). Campioni di plasma e saliva saranno ottenuti durante il protocollo di somministrazione di 2H2O per la misurazione dell'arricchimento di 2H2O corporeo.