Umsatz antigenspezifischer Lymphozyten nach Immunisierung mit dem 17D-Gelbfieber-Impfstoff

Im Allgemeinen treten T-Zell-Antworten auf Virusinfektionen in drei unterschiedlichen Stadien auf: Expansion, Kontraktion und Gedächtnis. Während der Expansion vermehren sich Antigen-spezifische CD8+ T-Zellen, um an Zahl zuzunehmen und die Fähigkeit zu erlangen, virusinfizierte Zellen abzutöten, d. h. zu „Effektoren“ zu werden. Sobald das Virus beseitigt ist, sterben 90–95 % der Effektoren. Der kleine Pool verbleibender Zellen differenziert sich allmählich zu Gedächtniszellen und bietet lebenslangen Schutz. Die Geschwindigkeit der Zellteilung unterscheidet sich in der Erzeugung von Effektoren und der Aufrechterhaltung der Gedächtniszellen. Diese Konzepte wurden hauptsächlich aus Mausstudien abgeleitet. Der Umsatz menschlicher CD8+-T-Zellen ist nicht vollständig verstanden, da geeignete Werkzeuge und Techniken für Studien am Menschen fehlen.

In diesem Protokoll wollen die Forscher die Lebensdauer und Zerfallskurve von Effektor-CD8+-T-Zellen und die Rate des homöostatischen Umsatzes von CD8+-Gedächtnis-T-Zellen (CD28+/--Untergruppen) nach der 17D-YFV-Immunisierung mit einer innovativen Methode verstehen, die von Dr. Marc Hellerstein entwickelt wurde Gruppe (an der University of California, Berkeley) zur Messung der DNA-Replikation und Zellproliferation beim Menschen unter Verwendung eines natürlich vorkommenden stabilen Isotops namens Deuterium (2H). Diese Technik wurde verwendet, um den Umsatz einer Reihe menschlicher Zelltypen in vivo zu verfolgen. Die Forscher dieser Studie planen, die 2H-Markierung zu verwenden, um YFV-spezifische CD8+-T-Zellen bei geimpften Menschen zu verfolgen (nur HLA-A2-positive Teilnehmer). Die Verfügbarkeit eines T-Zell-Epitops (A2-NS4B214), einer Hauptkomponente der humanen YFV-spezifischen CD8+-T-Zellantwort, ermöglicht die Längsschnittanalyse virusspezifischer CD8+-T-Zellen. Das einzigartige Merkmal dieser Studie ist, dass sie die Verfolgung der Differenzierung von YFV-spezifischen CD8+ T-Zellen beim Menschen ermöglicht. Somit können die Forscher die inhärenten Einschränkungen aufgrund der Heterogenität in Querschnittsstudien überwinden, die große CD8+-T-Zellen umfassen.

Wir planen, 50 gesunde, erwachsene Freiwillige (im Alter von 18 bis 45 Jahren) für die Projekte 1 und 2 zu rekrutieren, um die Antworten von CD8-T-Gedächtniszellen zu untersuchen. Alle Probanden erhalten den von der FDA zugelassenen YFV-17D-Impfstoff (mit der von der FDA zugelassenen Dosis und dem Verabreichungsweg). Die CD28-Expression wird bestimmt, um zu sehen, ob sie mit der Erzeugung und/oder Aufrechterhaltung von YFV-spezifischen CD8-Gedächtnis-T-Zellen gekoppelt ist. Phänotypische Unterschiede zwischen CD28+- und CD28-_YFV-spezifischen CD8-T-Zellen werden untersucht, um Unterschiede in der Langlebigkeit zu bestimmen. Genexpressionsprofile von CD28+ und CD28 YFV-spezifischen CD8 T-Zellen werden bestimmt. Der Einfluss von IL-7 und IL-15 auf das Überleben von YFV-spezifischen CD8-T-Zellen soll untersucht werden. Diese Informationen werden aus YFV-spezifischen Zellen gewonnen, die an Tag 0, 14, 28 und 3 bis 6 Monate, 1 bis 2 Jahre und > 5 Jahre nach der Impfung isoliert wurden.

Die Studie wird am Hope Clinic of Emory Vaccine Center durchgeführt. In die Studie werden Personen rekrutiert, die planen, in Endemiegebiete des Gelbfiebers zu reisen, und die den Impfstoff zu Reisezwecken benötigen, sowie Nicht-Reisende. Potenzielle Teilnehmer können von der Emory Travel Well Clinic oder dem CDC Employee Health oder dem Campus der Emory University oder der allgemeinen Bevölkerung der Metro Atlanta unter Verwendung von Radio- und Printwerbung, E-Mailings, Internet-Postings, Flyern und Postern rekrutiert werden. Die IRB-Zulassung der Emory University wird vor Beginn der Studie eingeholt.

Es wird ein Screening-Besuch durchgeführt, um die Eignung für die Studie zu bestimmen. Unterschriebene Einverständniserklärungen werden vor Beginn des Studienverfahrens eingeholt. Die Ein- und Ausschlusskriterien sowie eine kurze Anamnese und körperliche Untersuchung werden durchgeführt. Darüber hinaus werden die Teilnehmer gebeten, sich einer Phlebotomie zu unterziehen, um den HLA-Typ zu bestimmen. Teilnehmer, die positiv für das HLA A202-Allel sind, werden gebeten, an dieser Studie teilzunehmen. Es wird geschätzt, dass 25 % der kaukasischen US-Bevölkerung für dieses Allel positiv sind. Teilnehmern, die negativ auf dieses Allel getestet werden, werden andere Impfstoffstudien angeboten, die in der Emory Hope-Klinik durchgeführt werden, und ihre Teilnahme an diesem Protokoll endet.

Vor der Verabreichung der Gelbfieberimpfung wird das Nutzen-Risiko-Verhältnis der impfbedingten unerwünschten Ereignisse gegenüber dem Risiko, an Gelbfieber zu erkranken, bestimmt. Gesunde Personen, die zuvor nicht mit YFV-Impfstoff geimpft wurden, werden in die Studie aufgenommen. Es werden sowohl weibliche als auch männliche Freiwillige rekrutiert.

Wir planen, 50 gesunde Freiwillige im Alter zwischen 18 und 45 Jahren aufzunehmen. Um diese Einschreibungsziele zu erreichen, müssen wir möglicherweise 200 Probanden untersuchen. Alle Probanden erhalten den von der FDA zugelassenen YFV-17D-Impfstoff (in der von der FDA zugelassenen Dosis und Verabreichungsart) einmal am Tag 0 des Studienbesuchs. Blutproben werden von den Freiwilligen am Tag 0 und zu geplanten Zeitpunkten nach der Impfung erhalten. Das Gesamtvolumen des entnommenen Blutes überschreitet nicht die Grenze des Roten Kreuzes von 473 ml in 56 Tagen.

Die Freiwilligen der Studie werden auf einer täglichen Aufnahme von 100 ml - 150 ml 2 H2O gehalten, mit dem Ziel, eine Körperwasseranreicherung von 1,5-2 % aufrechtzuerhalten (unter der Annahme eines Gesamtkörperwasserumsatzes von ~ 3,5 Litern pro Tag bei gesunden, gehfähigen Probanden). Plasma- und Speichelproben werden während des 2H2O-Verabreichungsprotokolls zur Messung der 2H2O-Anreicherung im Körper entnommen.