Anthelmintien tehokkuuden seuranta maaperässä leviävien helmintien hoidossa P2 (ConWorm)

Ensisijainen tavoite:

Tietoisen suostumuksen saatuaan kohde-ikäryhmän koululaiset värvätään ja heitä pyydetään toimittamaan äskettäinen ulostenäyte (alle 4 tunnin välein), joka käsitellään ulosteen munamäärän (FEC) määrittämiseksi kunkin maaperän leviämisen jälkeen. Helmintit (STH) läsnä. Ensimmäistä näytteenottoa varten tavoitteena on rekisteröidä vähintään 250 tartunnan saanutta lasta vähintään yhteen maaperän välityksellä leviäviin helminteihin (STH). Tämä otoskoko valittiin tutkimuksen tehon tilastollisen analyysin perusteella käyttämällä satunnaisia ​​simulaatioita korreloivista ylihajotetuista ulosteen munamäärätiedoista, jotka kuvastavat varianssi-kovarianssirakennetta valituissa todellisissa FEC-tietosarjoissa. Tämä analyysi viittasi siihen, että vaadittiin jopa 200 yksilön otoskoko (α = 0,05, teho = 80 %), jotta voidaan havaita 10 prosenttiyksikön pudotus nollatehokkuudesta ~ 80 % (keskimääräinen prosenttiosuus FEC ∆ per yksilö) laajalla alueella. erilaisia ​​infektioskenaarioita. Suhteiden vakiotehoanalyysit osoittivat myös, että ~10 prosenttiyksikön pudotuksen havaitseminen nollakovettumisasteesta vaati 200 näytteen kokoa (suurimmat näytteet vaadittiin havaitsemaan poikkeamat noin 50 prosentin nollatehokkuudesta). Koska odotettu noudattamatta jättämisaste oli 25 %, 250 tartunnan saaneen henkilön otos katsottiin tarpeelliseksi jokaisessa tutkimuspaikassa.

Kaikille ulostenäytteitä antaville lapsille annetaan 500 mg:n mebendatsolia (MBZ) valvonnan alaisena (pureskelu + vesi). Mebendatsolin (MBZ) toimittaa (ilmaiseksi) koordinoiva ryhmä. Seitsemästä neljääntoista päivään (maksimiväli) hoidon jälkeen lapsilta otetaan toinen ulostenäyte FEC:n määrittämiseksi uudelleen. Koehenkilöt, jotka eivät pysty antamaan ulostenäytettä seurannassa tai joilla on samanaikainen vakava sairaus tai joilla on ripuli ensimmäisen näytteenoton aikana, suljetaan pois tutkimuksesta.

Toissijaiset tavoitteet:

Viidessä tutkimuspaikassa 100 infektoituneen henkilön ulostenäytteet tulee säilyttää ennen mebendatsolilla (MBZ) hoitoa yhdessä putkessa (1 gramma 10 ml:ssa 70 % etanolia). Samojen lasten näytteet tulee myös säilyttää uudelleen yhdessä putkessa (1 gramma 10 ml:ssa 70 % etanolia) käsittelyn jälkeen. Näytteet on lähetetty Gentin yliopiston parasitologian laboratorioon.

Ennen käsittelyä ja sen jälkeen kerätyt näytteet tutkitaan myöhemmin molekyylimäärityksillä, Necator americanus/Ancylostoma duodenal -taudin esiintyminen ja resistenssiin liittyvien β-tubuliinimutaatioiden esiintyminen.

Ennen käsittelyä kerätyt näytteet tutkitaan myöhemmin molekyylimäärityksillä, jotta voidaan arvioida eläinten rooli ihmisen maaperän välityksellä leviävien helmintien (STH) säiliönä.

Parasitologiset tekniikat, maaperän välityksellä leviävien helmintien (STH) ulosteen munamäärän määritys. Kaikki ulostenäytteet käsiteltiin käyttämällä McMaster-munien laskentatekniikkaa A. lumbricoides-, T. trichiuran ja hakamatojen aiheuttamien infektioiden havaitsemiseksi ja laskemiseksi. Kaikki tutkimuspaikat tuntevat tekniikan ja McMaster-dioja toimitettiin aiemmin.

Molekyylianalyysit (Ghentin yliopiston parasitologian laboratorio) ja deoksiribonukleiinihapon (DNA) uutto.

Soil-Transmitted Helminths (STH) DNA uutetaan näytteistä, jotka on säilötty 70-prosenttisessa etanolissa Qiagenin mini-jakkarasarjan avulla.

Maaperän välityksellä leviävien helmintien (STH) molekyylitunnistus. Maaperän välityksellä leviävien helmintien: Ascaris (n = 2), Trichuris (n = 2) ja hakamato (n = 4) esiintyminen arvioidaan käyttämällä erilaisia ​​molekyylimäärityksiä. Trichuris-lajien erilaistumista varten käytetään lajispesifistä polymeraasiketjureaktiota (PCR). Ascariksen ja koiran hakamadon erottamiseen käytetään PCR-restriction Fragment Length Polymorphism (PCR-RFLP) -menetelmää. Ihmisen hakamatoille käytetään kvantitatiivista PCR:ää.

Mebendatsoli (MBZ) -resistenssiin liittyvien mutaatioiden esiintyminen β-tubuliinissa Tämä erityinen tavoite toteutetaan yhteistyössä McGill Universityn (Kanada) kanssa.

Tilastollinen analyysi. Sekä kovettumisasteen (CR) että ulosteen munamäärän vähentämisen (FECR) avulla seurataan mebendatsolin (MBZ) tehokkuutta maaperän välityksellä leviäviä helminttejä vastaan. Tilastollinen analyysi arvioidaan Vercruysse et al., 2011 kuvaamalla tavalla.