Мониторинг эффективности антигельминтных средств для лечения гельминтов, передающихся через почву P2 (ConWorm)

Основная цель:

После получения информированного согласия будут набраны школьники в целевой возрастной группе, и им будет предложено предоставить недавний образец стула (интервал менее 4 часов), который будет обработан для определения количества фекальных яиц (ФЭК) для каждого передаваемого через почву Гельминты (STH) присутствуют. Для первоначального отбора проб цель состоит в том, чтобы зарегистрировать не менее 250 детей, инфицированных как минимум одним из гельминтов, передающихся через почву (ППГ). Этот размер выборки был выбран на основе статистического анализа мощности исследования с использованием случайного моделирования коррелированных сверхдисперсных данных подсчета фекальных яиц, отражающих структуру дисперсии-ковариации в выборке наборов данных реального подсчета фекальных яиц (FEC). Этот анализ показал, что размер выборки до 200 человек (α = 0,05, мощность = 80%) необходим для обнаружения снижения на 10 процентных пунктов от нулевой эффективности ~ 80% (средний процент FEC ∆ на человека) в широком диапазоне. широкий спектр сценариев заражения. Стандартный анализ мощности для пропорций также показал, что для обнаружения снижения скорости отверждения на ~10 процентных пунктов требуется выборка размером до 200 (наибольшая выборка требуется для обнаружения отклонений от нулевой эффективности примерно на 50%). Учитывая ожидаемый уровень несоблюдения в 25%, выборка из 250 инфицированных субъектов считалась необходимой в каждом исследовательском центре.

Все дети, предоставившие образцы стула, будут лечиться мебендазолом (МБЗ) однократно в дозе 500 мг под наблюдением (жевание + вода). Мебендазол (MBZ) будет предоставлен (бесплатно) координационной группой. От семи до четырнадцати дней (максимальный интервал) после лечения у детей будет взята вторая проба фекалий для повторного определения ФЭК. Субъекты, которые не могут предоставить образец стула при последующем наблюдении, или которые испытывают тяжелое сопутствующее заболевание или диарею во время первого взятия образца, будут исключены из исследования.

Второстепенные цели:

В 5 исследовательских центрах образцы фекалий 100 инфицированных субъектов должны быть сохранены до лечения мебендазолом (МБЗ) в одной пробирке (1 грамм в 10 мл 70% этанола). Пробы от тех же детей после обработки также следует снова сохранить в одной пробирке (1 грамм в 10 мл 70% этанола). Образцы были отправлены в лабораторию паразитологии Гентского университета.

Образцы, собранные до и после лечения, будут впоследствии исследованы с помощью молекулярного анализа на наличие Necator americanus/Ancylostoma duodenal и наличие мутаций β-тубулина, связанных с резистентностью.

Образцы, собранные до обработки, будут впоследствии исследованы с помощью молекулярных анализов для оценки роли животных как резервуара гельминтов, передающихся через почву (ПГЧ).

Паразитологические методы, определение количества фекальных яиц гельминтов, передающихся через почву (ПГГ). Все образцы фекалий обрабатывали с использованием метода подсчета яиц McMaster для обнаружения и подсчета инфекций, вызванных A. lumbricoides, T. trichiura и анкилостомами. Все исследовательские центры знакомы с этой техникой, и слайды McMaster были предоставлены ранее.

Молекулярные анализы (Лаборатория паразитологии, Гентский университет) и экстракция дезоксирибонуклеиновой кислоты (ДНК).

ДНК гельминтов, передающихся через почву (STH), будет извлечена из образцов, консервированных в 70% этаноле, с использованием мини-набора для стула Qiagen.

Молекулярная идентификация гельминтов, передающихся через почву (STH). Присутствие гельминтов, передающихся через почву: Ascaris (n = 2), Trichuris (n = 2) и анкилостомы (n = 4) будет оцениваться с использованием различных молекулярных анализов. Для дифференциации видов Trichuris будет применяться видоспецифическая полимеразная цепная реакция (ПЦР). Для дифференциации аскарид и собачьих анкилостомозов будет использоваться ПЦР-полиморфизм длины рестрикционных фрагментов (ПЦР-ПДРФ). Для анкилостомоза человека будет применяться количественная ПЦР.

Наличие мутаций в β-тубулине, связанных с устойчивостью к мебендазолу (MBZ). Эта конкретная задача будет выполняться в сотрудничестве с Университетом Макгилла (Канада).

Статистический анализ. Для контроля эффективности мебендазола (MBZ) против гельминтов, передающихся через почву, будут рассматриваться как показатель излечения (CR), так и снижение количества фекальных яиц (FECR). Статистический анализ будет оцениваться, как описано Vercruysse et al., 2011.