Monitoraggio dell'efficacia degli antielmintici per il trattamento degli elminti trasmessi nel suolo P2 (ConWorm)

Obiettivo primario:

Dopo aver ottenuto il consenso informato, gli scolari nella fascia di età target verranno reclutati e verrà chiesto di fornire un campione di feci recente (un intervallo inferiore a 4 ore) che verrà elaborato per determinare il numero di uova fecali (FEC) per ciascun suolo trasmesso Elminti (STH) presenti. Per il campionamento iniziale l'obiettivo è quello di arruolare almeno 250 bambini infetti per almeno uno degli elminti trasmessi dal suolo (STH). Questa dimensione del campione è stata selezionata in base all'analisi statistica della potenza dello studio, utilizzando simulazioni casuali di dati correlati sul conteggio delle uova fecali sovradispersi che riflettono la struttura di varianza-covarianza in una selezione di set di dati reali sul conteggio delle uova fecali (FEC). Questa analisi ha suggerito che era necessaria una dimensione del campione fino a 200 individui (α = 0,05, potenza = 80%) per rilevare un calo di 10 punti percentuali da un'efficacia nulla di ~ 80% (percentuale media FEC ∆ per individuo) su un ampio gamma di scenari di infezione. Le analisi di potenza standard per le proporzioni hanno anche indicato che il rilevamento di un calo di circa 10 punti percentuali da un tasso di cura nullo richiedeva dimensioni del campione fino a 200 (i campioni più grandi erano necessari per rilevare scostamenti dall'efficacia nulla di circa il 50%). Dato un tasso di non conformità previsto del 25%, è stato quindi ritenuto necessario un campione di 250 soggetti infetti in ciascun sito di studio.

Tutti i bambini che forniscono campioni di feci saranno trattati con mebendazolo (MBZ) singola tavola da 500 mg sotto supervisione (masticazione + acqua). Il mebendazolo (MBZ) sarà fornito (gratuitamente) dal gruppo di coordinamento. Da sette a quattordici giorni (intervallo massimo) dopo il trattamento verrà prelevato un secondo campione fecale dai bambini per determinare nuovamente la FEC. I soggetti che non sono in grado di fornire un campione di feci al follow-up, o che stanno vivendo una grave condizione medica concomitante o hanno diarrea al momento del primo campionamento, saranno esclusi dallo studio.

Obiettivi secondari:

In 5 siti di studio, i campioni fecali di 100 soggetti infetti devono essere conservati prima del trattamento con mebendazolo (MBZ) in una provetta (1 grammo in 10 ml di etanolo al 70%). Anche i campioni degli stessi bambini devono essere conservati nuovamente in una provetta (1 grammo in 10 ml di etanolo al 70%) dopo il trattamento. I campioni devono essere inviati al Laboratorio di Parassitologia dell'Università di Ghent.

I campioni, raccolti prima e dopo il trattamento, saranno successivamente esaminati mediante saggi molecolari della presenza di Necator americanus/Ancylostoma duodenal e della presenza di mutazioni della β-tubulina correlate alla resistenza.

I campioni raccolti prima del trattamento saranno successivamente esaminati mediante saggi molecolari per valutare il ruolo degli animali come serbatoio per gli elminti umani trasmessi dal suolo (STH).

Tecniche parassitologiche, determinazione del numero di uova fecali di elminti trasmessi dal suolo (STH). Tutti i campioni fecali sono stati elaborati utilizzando la tecnica di conteggio delle uova McMaster per la rilevazione e il conteggio delle infezioni da A. lumbricoides, T. trichiura e anchilostomi. Tutti i siti di studio hanno familiarità con la tecnica e le diapositive McMaster sono state fornite in precedenza.

Analisi molecolari (Laboratorio di Parassitologia, Università di Ghent) ed estrazione dell'acido desossiribonucleico (DNA).

Il DNA degli elminti trasmessi dal suolo (STH) sarà estratto dai campioni conservati in etanolo al 70% utilizzando il mini kit di feci Qiagen.

Identificazione molecolare degli elminti trasmessi dal suolo (STH). La presenza delle specie di elminti trasmessi dal suolo: Ascaris (n= 2), Trichuris (n = 2) e anchilostomi (n = 4) sarà valutata mediante diversi saggi molecolari. Per la differenziazione delle specie di Trichuris sarà applicata la PCR (Polymerase Chain Reaction) specie-specifica. Per la differenziazione di Ascaris e anchilostomi canini verrà utilizzato un polimorfismo della lunghezza del frammento di restrizione PCR (PCR-RFLP). Per gli anchilostomi umani verrà applicata una PCR quantitativa.

Presenza di mutazioni nella β-tubulina correlate alla resistenza al mebendazolo (MBZ) Questo obiettivo specifico sarà condotto in collaborazione con la McGill University (Canada).

Analisi statistica. Sia il tasso di guarigione (CR) che la riduzione del conteggio delle uova fecali (FECR) saranno presi in considerazione per monitorare l'efficacia del mebendazolo (MBZ) contro gli elminti trasmessi dal suolo. L'analisi statistica sarà valutata come descritto da Vercruysse et al., 2011.