Überwachung der Wirksamkeit von Anthelmintika zur Behandlung von bodenübertragenen Helminthen P2 (ConWorm)

Hauptziel:

Nach Erhalt der Einverständniserklärung werden Schulkinder in der Zielaltersgruppe rekrutiert und gebeten, eine aktuelle Stuhlprobe (ein Intervall von weniger als 4 Stunden) abzugeben, die verarbeitet wird, um die fäkale Eizahl (FEC) für jede Bodenübertragung zu bestimmen Helminthen (STH) vorhanden. Ziel der Erstbemusterung ist es, mindestens 250 infizierte Kinder für mindestens einen der Soil-Transmitted Helminths (STH) zu rekrutieren. Diese Stichprobengröße wurde basierend auf einer statistischen Analyse der Studienleistung ausgewählt, wobei Zufallssimulationen von korrelierten überstreuten Daten zur Eizahl im Stuhl verwendet wurden, die die Varianz-Kovarianz-Struktur in einer Auswahl von Datensätzen zur tatsächlichen Eizahl im Stuhl (FEC) widerspiegeln. Diese Analyse legte nahe, dass eine Stichprobengröße von bis zu 200 Individuen (α = 0,05, Power = 80 %) erforderlich war, um einen Abfall von 10 Prozentpunkten von einer Null-Wirksamkeit von ~ 80 % (mittlerer Prozentsatz FEC ∆ pro Individuum) über einen weiten Bereich zu erkennen Reihe von Infektionsszenarien. Standard-Power-Analysen für Anteile zeigten auch, dass die Erkennung eines Abfalls von ~10 Prozentpunkten von einer Null-Heilungsrate Probengrößen von bis zu 200 erforderte (die größten Proben sind erforderlich, um Abweichungen von Null-Wirksamkeiten von etwa 50 % zu erkennen). Angesichts einer erwarteten Non-Compliance-Rate von 25 % wurde daher eine Stichprobe von 250 infizierten Probanden an jedem Studienstandort für notwendig erachtet.

Alle Kinder, die Stuhlproben abgeben, werden mit Mebendazol (MBZ) Einzeltablette von 500 mg unter Aufsicht (Kauen + Wasser) behandelt. Das Mebendazol (MBZ) wird (kostenlos) von der koordinierenden Gruppe bereitgestellt. Sieben bis vierzehn Tage (maximales Intervall) nach der Behandlung wird den Kindern eine zweite Kotprobe entnommen, um die FEC erneut zu bestimmen. Probanden, die bei der Nachuntersuchung keine Stuhlprobe abgeben können oder die zum Zeitpunkt der ersten Probenahme an einer schweren Begleiterkrankung leiden oder an Durchfall leiden, werden von der Studie ausgeschlossen.

Sekundäre Ziele:

An 5 Studienzentren sollten Stuhlproben von 100 infizierten Probanden vor der Behandlung mit Mebendazol (MBZ) in einem Röhrchen (1 Gramm in 10 ml 70 % Ethanol) aufbewahrt werden. Proben der gleichen Kinder sollten auch nach der Behandlung wieder in einem Röhrchen (1 Gramm in 10 ml 70 % Ethanol) aufbewahrt werden. Proben müssen an das Labor für Parasitologie der Universität Gent geschickt werden.

Die vor und nach der Behandlung entnommenen Proben werden anschließend durch molekulare Assays auf das Vorkommen von Necator americanus/Ancylostoma duodenal und das Vorkommen von β-Tubulin-Mutationen im Zusammenhang mit der Resistenz untersucht.

Die vor der Behandlung gesammelten Proben werden anschließend durch molekulare Assays untersucht, um die Rolle der Tiere als Reservoir für menschliche bodenübertragene Helminthen (STH) zu beurteilen.

Parasitologische Techniken, Bestimmung der fäkalen Eizahl von bodenübertragenen Helminthen (STH). Alle Kotproben wurden unter Verwendung der McMaster-Eierzähltechnik zum Nachweis und zur Zählung von Infektionen mit A. lumbricoides, T. trichiura und Hakenwürmern verarbeitet. Alle Studienzentren sind mit der Technik vertraut und McMaster-Objektträger wurden zuvor bereitgestellt.

Molekulare Assays (Labor für Parasitologie, Universität Gent) und Extraktion von Desoxyribonukleinsäure (DNA).

DNA von durch den Boden übertragenen Helminthen (STH) wird aus den Proben extrahiert, die mit dem Mini-Stuhl-Kit von Qiagen in Ethanol 70 % konserviert wurden.

Molekulare Identifizierung von bodenübertragenen Helminthen (STH). Das Vorhandensein der durch den Boden übertragenen Helminthenarten: Ascaris (n = 2), Trichuris (n = 2) und Hakenwürmer (n = 4) wird mit verschiedenen molekularen Assays bewertet. Zur Differenzierung von Trichuris-Spezies wird die artspezifische Polymerase-Kettenreaktion (PCR) angewendet. Zur Unterscheidung von Ascaris und Hakenwürmern des Hundes wird ein PCR-Restriktionsfragmentlängenpolymorphismus (PCR-RFLP) verwendet. Für die menschlichen Hakenwürmer wird eine quantitative PCR angewendet.

Vorhandensein von Mutationen in β-Tubulin im Zusammenhang mit Mebendazol (MBZ)-Resistenz Dieses spezifische Ziel wird in Zusammenarbeit mit der McGill University (Kanada) durchgeführt.

Statistische Analyse. Sowohl die Heilungsrate (CR) als auch die Reduzierung der Eizahl im Kot (FECR) werden berücksichtigt, um die Wirksamkeit von Mebendazol (MBZ) gegen durch den Boden übertragene Helminthen zu überwachen. Die statistische Auswertung erfolgt wie von Vercruysse et al., 2011 beschrieben.