Monitoramento da eficácia de anti-helmínticos para o tratamento de helmintos P2 transmitidos pelo solo (ConWorm)

Objetivo primário:

Após a obtenção do consentimento informado, as crianças em idade escolar na faixa etária alvo serão recrutadas e solicitadas a fornecer uma amostra de fezes recente (um intervalo de menos de 4 horas) que será processada para determinar a Contagem de Ovos Fecais (FEC) para cada Helmintos (STH) presentes. Para a amostragem inicial, o objetivo é inscrever pelo menos 250 crianças infectadas por pelo menos um dos helmintos transmitidos pelo solo (STH). Este tamanho de amostra foi selecionado com base na análise estatística do poder do estudo, usando simulações aleatórias de dados de contagem de ovos fecais superdispersos refletindo a estrutura de variância-covariância em uma seleção de conjuntos de dados reais de contagem de ovos fecais (FEC). Esta análise sugeriu que um tamanho de amostra de até 200 indivíduos (α = 0,05, poder = 80%) era necessário para detectar uma queda de 10 pontos percentuais de uma eficácia nula de ~ 80% (porcentagem média de FEC ∆ por indivíduo) em uma ampla variedade de cenários de infecção. As análises de poder padrão para proporções também indicaram que a detecção de uma queda de ~ 10 pontos percentuais de uma taxa de cura nula exigia tamanhos de amostra de até 200 (as maiores amostras sendo necessárias para detectar desvios de eficácias nulas de cerca de 50%). Dada uma taxa de incumprimento antecipada de 25%, considerou-se necessária uma amostra de 250 indivíduos infectados em cada centro de estudo.

Todas as crianças que fornecerem amostras de fezes serão tratadas com mebendazol (MBZ) comprimido único de 500mg sob supervisão (mastigação + água). O mebendazol (MBZ) será fornecido (gratuitamente) pelo grupo coordenador. Sete a quatorze dias (intervalo máximo) após o tratamento, uma segunda amostra fecal será coletada das crianças para determinar novamente o FEC. Os indivíduos que não puderem fornecer uma amostra de fezes no acompanhamento, ou que apresentarem uma condição médica grave concomitante ou tiverem diarreia no momento da primeira coleta, serão excluídos do estudo.

Objetivos secundários:

Em 5 locais de estudo, amostras fecais de 100 indivíduos infectados devem ser preservadas antes do tratamento com mebendazol (MBZ) em um tubo (1 grama em 10 ml de etanol a 70%). Amostras das mesmas crianças também devem ser preservadas novamente em um tubo (1 grama em 10 ml de etanol a 70%) após o tratamento. As amostras devem ser enviadas para o Laboratório de Parasitologia da Universidade de Ghent.

As amostras coletadas antes e após o tratamento serão posteriormente examinadas por ensaios moleculares para a ocorrência de Necator americanus/Ancylostoma duodenal e para a ocorrência de mutações β-tubulina relacionadas à resistência.

As amostras coletadas antes do tratamento serão posteriormente examinadas por ensaios moleculares para avaliar o papel dos animais como reservatório de helmintos humanos transmitidos pelo solo (HTS).

Técnicas parasitológicas, determinação da Contagem de Ovos Fecais de Helmintos Transmitidos pelo Solo (STH). Todas as amostras fecais foram processadas usando a técnica de contagem de ovos de McMaster para a detecção e contagem de infecções por A. lumbricoides, T. trichiura e ancilostomídeos. Todos os locais de estudo estão familiarizados com a técnica e as lâminas McMaster foram fornecidas anteriormente.

Ensaios moleculares (Laboratório de Parasitologia, Universidade de Ghent) e extração de ácido desoxirribonucléico (DNA).

O DNA de helmintos transmitidos pelo solo (STH) será extraído das amostras preservadas em etanol 70% usando o mini kit de fezes Qiagen.

Identificação molecular de helmintos transmitidos pelo solo (STH). A presença das espécies de helmintos transmitidos pelo solo: Ascaris (n= 2), Trichuris (n = 2) e ancilostomídeos (n = 4) será avaliada por diferentes ensaios moleculares. Para a diferenciação das espécies de Trichuris será aplicada a reação em cadeia da polimerase (PCR) espécie-específica. Para a diferenciação de Ascaris e ancilostomídeos caninos será utilizado o PCR-Restriction Fragment Length Polymorphism (PCR-RFLP). Para os ancilostomídeos humanos será aplicada uma PCR quantitativa.

Presença de mutações na β-tubulina relacionadas à resistência ao mebendazol (MBZ) Este objetivo específico será realizado em colaboração com a McGill University (Canadá).

Análise estatística. Tanto a Taxa de Cura (CR) quanto a Redução da Contagem de Ovos Fecais (FECR) serão consideradas para monitorar a eficácia do mebendazol (MBZ) contra helmintos transmitidos pelo solo. A análise estatística será avaliada conforme descrito por Vercruysse et al., 2011.