Overvåking av effekten av anthelmintika for behandling av jordoverførte helminths P2 (ConWorm)

Hovedmål:

Etter å ha innhentet informert samtykke, vil skolebarn i målaldersgruppen bli rekruttert og bedt om å gi en fersk avføringsprøve (et intervall på mindre enn 4 timer) som vil bli behandlet for å bestemme antall fekale egg (FEC) for hver jordoverførte jord Helminths (STH) tilstede. For den første prøvetakingen er målet å registrere minst 250 infiserte barn for minst én av de jordoverførte helmintene (STH). Denne utvalgsstørrelsen ble valgt basert på statistisk analyse av studiekraft, ved å bruke tilfeldige simuleringer av korrelerte data for over-spredning av fekal eggtelling som gjenspeiler varians-kovariansstrukturen i et utvalg av reelle datasett for fekal eggtelling (FEC). Denne analysen antydet at en prøvestørrelse på opptil 200 individer (α = 0,05, kraft = 80 %) var nødvendig for å oppdage et fall på 10 prosentpoeng fra en nulleffektivitet på ~ 80 % (gjennomsnittlig prosentandel FEC ∆ per individ) over en bred rekke infeksjonsscenarier. Standard kraftanalyser for proporsjoner indikerte også at deteksjonen av et ~10 prosentpoeng fall fra en nullherdingshastighet krevde prøvestørrelser opp til 200 (de største prøvene var nødvendige for å oppdage avvik fra nulleffekter på rundt 50%). Gitt en forventet avviksrate på 25 %, ble en prøve på 250 infiserte personer derfor ansett som nødvendig på hvert studiested.

Alle barn som gir avføringsprøver vil bli behandlet med mebendazol (MBZ) enkeltbord på 500 mg under tilsyn (tygging + vann). Mebendazolen (MBZ) vil bli gitt (gratis) av koordineringsgruppen. Syv opptil fjorten dager (maksimalt intervall) etter behandling vil en andre avføringsprøve bli samlet inn fra barna for å bestemme FEC på nytt. Personer som ikke er i stand til å gi en avføringsprøve ved oppfølging, eller som opplever en alvorlig samtidig medisinsk tilstand eller har diaré ved første prøvetaking, vil bli ekskludert fra studien.

Sekundære mål:

På 5 studiesteder bør avføringsprøver av 100 infiserte forsøkspersoner oppbevares før behandling med mebendazol (MBZ) i ett rør (1 gram i 10 ml 70 % etanol). Prøver av de samme barna bør også oppbevares igjen i ett rør (1 gram i 10 ml 70 % etanol) etter behandling. Prøver er sendt til Laboratory of Parasitology, Ghent University.

Prøvene, samlet før og etter behandling, vil deretter bli undersøkt med molekylære analyser forekomsten av Necator americanus/Ancylostoma duodenal og forekomsten av β-tubulinmutasjoner relatert til resistens.

Prøvene som samles inn før behandling vil deretter bli undersøkt med molekylære analyser for å vurdere rollen til dyr som et reservoar for humane jordoverførte helminths (STH).

Parasitologiske teknikker, bestemmelse av Fecal Egg Count of Soil-Transmitted Helminths (STH). Alle fekale prøver ble behandlet ved bruk av McMaster eggtellingsteknikk for påvisning og opptelling av infeksjoner med A. lumbricoides, T. trichiura og hakeorm. Alle studiestedene er kjent med teknikken og McMaster-lysbilder ble levert tidligere.

Molekylære analyser (Laboratory of Parasitology, Ghent University) og deoksyribonukleinsyre (DNA) ekstraksjon.

DNA fra Soil-Transmitted Helminths (STH) vil bli ekstrahert fra prøvene konservert i etanol 70 % ved hjelp av Qiagen mini avføringssett.

Molekylær identifikasjon av jordoverførte helminths (STH). Tilstedeværelsen av jordoverførte helminths-arter: Ascaris (n= 2), Trichuris (n = 2) og hakeorm (n = 4) vil bli vurdert ved hjelp av forskjellige molekylære analyser. For differensiering av Trichuris-arter vil artsspesifikk polymerasekjedereaksjon (PCR) bli brukt. For differensiering av Ascaris og hundehakeormene vil en PCR-Restriction Fragment Length Polymorphism (PCR-RFLP) bli brukt. For de menneskelige krokormene vil en kvantitativ PCR bli brukt.

Tilstedeværelse av mutasjoner i β-tubulin relatert til mebendazol (MBZ) resistens Dette spesifikke målet vil bli utført i samarbeid med McGill University (Canada).

Statistisk analyse. Både Cure Rate (CR) og Fecal Egg Count Reduction (FECR) vil bli vurdert for å overvåke effekten av mebendazol (MBZ) mot jordoverførte helminths. Den statistiske analysen vil bli vurdert som beskrevet av Vercruysse et al., 2011.