Övervakning av effekten av anthelmintika för behandling av jordöverförda helminter P2 (ConWorm)

Huvudmål:

Efter att ha erhållit informerat samtycke, kommer skolbarn i målåldersgruppen att rekryteras och ombeds att tillhandahålla ett färskt avföringsprov (ett intervall på mindre än 4 timmar) som kommer att bearbetas för att bestämma antalet fekala ägg (FEC) för varje jord som överförs Helminths (STH) närvarande. För den första provtagningen är målet att registrera minst 250 smittade barn för minst en av de jordöverförda helmintar (STH). Denna urvalsstorlek valdes baserat på statistisk analys av studiestyrka, med hjälp av slumpmässiga simuleringar av korrelerade överdispergerade data om antalet fekalägg som återspeglar varians-kovariansstrukturen i ett urval av verkliga datauppsättningar för antal fekalägg (FEC). Denna analys antydde att en provstorlek på upp till 200 individer (α = 0,05, effekt = 80 %) krävdes för att upptäcka en minskning med 10 procentenheter från en nolleffekt på ~ 80 % (medelprocent FEC ∆ per individ) över en bred olika infektionsscenarier. Standardeffektanalyser för proportioner indikerade också att detekteringen av en ~10 procentenheters minskning från en nollhärdningshastighet krävde provstorlekar upp till 200 (de största proverna krävdes för att detektera avvikelser från nolleffekter på cirka 50%). Givet en förväntad bristande efterlevnadsgrad på 25 % ansågs därför ett urval av 250 infekterade försökspersoner vara nödvändigt vid varje studieplats.

Alla barn som ger avföringsprover kommer att behandlas med mebendazol (MBZ) enkelbord på 500 mg under uppsikt (tugga + vatten). Mebendazolen (MBZ) kommer att tillhandahållas (gratis) av den samordnande gruppen. Sju upp till fjorton dagar (maximalt intervall) efter behandlingen kommer ett andra fekalt prov att samlas in från barnen för att bestämma FEC igen. Försökspersoner som inte kan ge ett avföringsprov vid uppföljning, eller som upplever ett allvarligt samtidig medicinskt tillstånd eller har diarré vid tidpunkten för första provtagningen, kommer att uteslutas från studien.

Sekundära mål:

På 5 studieställen bör fekala prover från 100 infekterade försökspersoner bevaras före behandling med mebendazol (MBZ) i ett rör (1 gram i 10 ml 70 % etanol). Prover av samma barn bör också bevaras igen i ett rör (1 gram i 10 ml 70 % etanol) efter behandling. Prover har skickats till Laboratory of Parasitology, Gent University.

Proverna, som samlas in före och efter behandling, kommer därefter att undersökas med molekylära analyser, förekomsten av Necator americanus/Ancylostoma duodenal och förekomsten av β-tubulinmutationer relaterade till resistens.

Proverna som samlas in före behandling kommer därefter att undersökas med molekylära analyser för att bedöma djurens roll som reservoar för mänskliga jordöverförda helminter (STH).

Parasitologiska tekniker, bestämning av Fecal Egg Count of Soil-Transmitted Helminths (STH). Alla fekala prover bearbetades med McMasters äggräkningsteknik för detektion och räkning av infektioner med A. lumbricoides, T. trichiura och hakmaskar. Alla studieplatser är bekanta med tekniken och McMaster-bilder tillhandahölls tidigare.

Molekylära analyser (Laboratory of Parasitology, Gent University) och extraktion av deoxiribonukleinsyra (DNA).

DNA från Soil-Transmitted Helminths (STH) kommer att extraheras från proverna bevarade i etanol 70% med hjälp av Qiagen mini pall kit.

Molekylär identifiering av jordöverförda helminter (STH). Förekomsten av jordöverförda helmintharter: Ascaris (n=2), Trichuris (n=2) och hakmaskar (n=4) kommer att bedömas med olika molekylära analyser. För differentiering av Trichuris-arter kommer artspecifik polymeraskedjereaktion (PCR) att användas. För differentiering av Ascaris och hundhakmaskarna kommer en PCR-Restriction Fragment Length Polymorphism (PCR-RFLP) att användas. För de mänskliga hakmaskarna kommer en kvantitativ PCR att tillämpas.

Förekomst av mutationer i β-tubulin relaterade till mebendazolresistens (MBZ) Detta specifika mål kommer att utföras i samarbete med McGill University (Kanada).

Statistisk analys. Både Cure Rate (CR) och Fecal Egg Count Reduction (FECR) kommer att övervägas för att övervaka effekten av mebendazol (MBZ) mot jordöverförda helminter. Den statistiska analysen kommer att bedömas enligt beskrivningen av Vercruysse et al., 2011.